一种温敏性材料及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115073658A(43)申请公布日2022.09.20(21)申请号202210782549.5C12N5/077(2010.01)(22)申请日2022.07.05C12N5/0775(2010.01)(71)申请人东南大学地址211102江苏省南京市江宁区东南大学路2号(72)发明人张天柱杨柳新(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师柏尚春(51)Int.Cl.C08F220/54(2006.01)C08F220/58(2006.01)C08F222/38(2006.01)C08F2/16(2006.01)C12N5/00(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图4页(54)发明名称一种温敏性材料及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种温敏性材料及其制备方法和应用，该温敏性材料以N‑异丙基丙烯酰胺和多巴胺甲基丙烯酰胺为原料，经过自由基沉淀聚合法合成得到聚(N‑异丙基丙烯酰胺co多巴胺甲基丙烯酰胺)的微凝胶。本发明采用的原料价格低廉，合成简便，得到的温敏性材料无毒无害、生物学相容性好。通过将温敏性微凝胶旋涂的二氧化硅玻片表面成功培养细胞，并通过简单的降温使细胞自动从基底上脱落。该细胞收获的方式过程中不使用胰酶，避免了酶解对细胞造成损伤，在最大程度上保留细胞的活力。在细胞的批量生产、干细胞收获、组织工程修复和图案化细胞培养等方面有非常重大的应用价值。CN115073658ACN115073658A权利要求书1/1页1.一种温敏性材料，其特征在于，所述温敏性材料是包括以N‑异丙基丙烯酰胺和多巴胺甲基丙烯酰胺为原材料，通过自由基沉淀聚合法制备得到的微凝胶。2.根据权利要求1所述的温敏性材料，其特征在于，所述微凝胶的平均粒径在37℃时为50‑90nm。3.权利要求1或2所述的温敏性材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将N‑异丙基丙烯酰胺、交联剂、多巴胺甲基丙烯酰胺、促进剂和表面活性剂溶解到水中，在氩气保护下加热搅拌反应，加入引发剂，继续反应，透析，将获得的溶液冻干，得到白色的聚(N‑异丙基丙烯酰胺co多巴胺甲基丙烯酰胺)微凝胶。4.根据权利要求3所述的温敏性材料的制备方法，其特征在于，交联剂为N,N'‑亚甲基双丙烯酰胺，促进剂为四甲基乙二胺，表面活性剂为十二烷基硫酸钠，引发剂为过硫酸铵或过硫酸钾。5.根据权利要求3所述的温敏性材料的制备方法，其特征在于，N‑异丙基丙烯酰胺、交联剂、多巴胺甲基丙烯酰胺、促进剂、表面活性剂和引发剂的摩尔比为100：1：0.1‑10：2.9：12.9。6.根据权利要求3所述的温敏性材料的制备方法，其特征在于，在氩气保护下加热搅拌反应时的温度为65‑80℃，反应的时间为30‑60min，在氩气保护下加热搅拌反应时的搅拌速率为200‑600rpm，加入引发剂后继续反应的时间为4‑6h。7.权利要求1或2所述的温敏性材料在收获培养细胞中的应用。8.一种权利要求7所述温敏性材料在收获培养细胞中的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)二氧化硅玻片的预处理：使用等离子体机处理后，再利用聚乙烯亚胺修饰二氧化硅玻片；(2)将权利要求1或2所述的温敏性材料制成微凝胶溶液，将微凝胶溶液涂覆到预处理过的二氧化硅玻片上，真空干燥，得到涂有温敏性材料的二氧化硅玻片；(3)将涂有温敏性材料的二氧化硅玻片用于培养细胞。9.根据权利要求8所述的应用方法，其特征在于，步骤(1)中，二氧化硅玻片的预处理是将二氧化硅玻片用无水乙醇和超纯水洗涤之后，用等离子体机处理，浸泡PEI溶液中，用清水洗涤，真空干燥之后备用。10.根据权利要求4所述的温敏性材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，微凝胶溶液的浓度为0.5‑1wt％，每0.785cm2的二氧化硅玻片面积旋涂50‑100μL的微凝胶溶液。2CN115073658A说明书1/7页一种温敏性材料及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种温敏性材料及其制备方法和用于收获培养细胞的应用，属用于细胞培养材料技术领域。背景技术[0002]在组织工程和再生医学工程中，大量的细胞培养传代时需要使用酶解，胰酶消化法是在蛋白酶水解的作用下破坏细胞之间的连接蛋白导致细胞的解离，切断整联蛋白和纤维连接蛋白之间的连接，这种细胞收获的方法存在明显的弊端，即容易使细胞功能缺失或者降低细胞的活力。[0003]聚(N‑异丙基丙烯酰胺)是一种温敏性高分子材料，在其修饰过的基底上的温度高于其临界溶解温度时，表面相对输水；而当温度低于临界溶解温度时，表面相对亲水。采用细胞在输水表面上粘附和增殖，但是在亲水表面上自动分离的性质，通过简单降低细胞的培养温度就能将细胞从基底上分离出来。[0004]然而，纯的