一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115290806A(43)申请公布日2022.11.04(21)申请号202210915527.1(22)申请日2022.08.01(71)申请人宁波工程学院地址315016浙江省宁波市海曙区翠柏路89号申请人宁波海关技术中心(72)发明人王婷婷陈易晖(74)专利代理机构宁波天一专利代理有限公司33207专利代理师杨高(51)Int.Cl.G01N30/08(2006.01)G01N30/74(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图7页(54)发明名称一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法(57)摘要一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，包括用聚乙烯二醇修饰埃洛石，用所述聚乙烯二醇修饰埃洛石装填亲水性和阳离子交换混合模式固相萃取柱，对鱼肉的生物胺提取物进行净化和富集，净化液经苯甲酰氯衍生化之后，形成的生物胺衍生物具有紫外吸收，以及进行液相色谱分离和紫外检测器检测。采用上述方法对鱼肉中生物胺进行分析检测。采用亲水性和阳离子交换混合模式吸附剂解决了传统分析方法中极性生物胺在疏水性吸附剂上保留弱和检测灵敏度低的问题，增加了吸附剂对极性生物胺的吸附容量，以此为基础建立的固相萃取方法具有检测灵敏度高，重现性好的优点。为鱼类产品的食品安全检测提供科学实用的方法。CN115290806ACN115290806A权利要求书1/2页1.一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征包括以下步骤：A、聚乙烯二醇修饰埃洛石的方法如下：将5~25g经六偏磷酸钠纯化的埃洛石加入到含有1~5mL聚乙烯二醇‑4‑壬苯基‑3‑硫代丙基醚钾盐的100mL水中，在25~40°C下，500~1200rpm转速搅拌后，用水洗涤数次，离心后，60~105°C干燥5~10h，得到聚乙烯二醇修饰的埃洛石；B、称取50~300mg聚乙烯二醇修饰的埃洛石，转移到装有5μm下筛板和20μm上筛板的3~10mL柱管中压实；C、将已装好聚乙烯二醇修饰的埃洛石的固相萃取柱，分别以5mL甲醇和5mL水活化，‑198%乙腈水溶液平衡柱子，1~100mL生物胺的混合溶液以0.5~2mLmin的流速通过固相萃‑1取柱完成上样，随后用4~10mL含有60%乙腈的2.4molL氨水溶液洗脱；D、取1mL洗脱溶液，采用苯甲酰氯衍生化，使生物胺的胺基与酰氯基团反应生成酰胺基，衍生化后的生物胺具有紫外吸收作用；E、取经衍生化后的生物胺混合液10~20μL注入液相色谱仪进行分离，紫外检测器检测。2.根据权利要求1所述的一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征是所述的六偏磷酸钠纯化埃洛石的步骤如下：取10~50g埃洛石，加入到100~500mL含有六偏磷酸钠质量浓度为0.05%~0.25%的水溶液中，搅拌30~60min后，静止20min，弃去沉淀部分，分散的埃洛石经过数次水洗，离心后，60~105°C干燥5~10h，得到六偏磷酸钠纯化的埃洛石。3.根据权利要求1所述的一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征是所述的生物胺的混合溶液为组胺、1，4‑丁二胺、苯乙胺和精胺的标准品混合溶液，溶于‑1‑180%~98%乙腈中，浓度范围分别为组胺31.3~1000μgL、1，4‑丁二胺6.3~200μgL、苯乙胺1.620‑1‑1~0μgL和精胺3.1~200μgL，该生物胺的混合溶液用于固相萃取条件的优化。4.根据权利要求1所述的一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征是所述的苯甲酰氯衍生化步骤如下：取1mL洗脱溶液于5mL塑料离心管中，加入1mL2molL‑1NaOH溶液和60μL苯甲酰氯，振荡30s混合后，放入30°C水浴反应40min；反应完成后，加入1gNaCl，振荡30s，加入1mL乙酸乙酯，混合后，3000rmin‑1离心10min，取上层有机相转入5mL带刻度的玻璃离心管中，40°C氮气吹干；采用0.5~1mL甲醇重溶，过滤后，取10~20μL注入液相色谱仪进行分离，采用紫外检测器检测。5.根据权利要求1所述的一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征是所述的液相色谱分离和紫外检测器检测步骤如下：色谱柱为安捷伦Poroshell120EC‑C18柱，4.6mm×150mm，4μm；紫外检测波长230~254nm；进样量10~20μL；流速0.8~1‑1mLmin；流动相为甲醇和水，梯度洗脱如下：0.0~20.0min，5%~75%甲醇；20.0~25.0min，75%甲醇；25.1~30.0min，100%甲醇。6.根据权力要求1所述的一种亲水作用和阳离子交换的固相萃取生物胺的方法，其特征是鱼体内生物胺提取方法如下：选择不同品种样品鱼，去除鱼皮、鱼骨