一种使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115710571A(43)申请公布日2023.02.24(21)申请号202211123547.1C12M1/42(2006.01)(22)申请日2022.09.15C12M1/02(2006.01)C12M1/00(2006.01)(71)申请人郑州创迈生物科技有限公司C12M1/36(2006.01)地址450000河南省郑州市航空港经济综C12M1/04(2006.01)合实验区黄海路与生物科技二街交叉口东北角郑州临空生物医药园9号楼(72)发明人颜成男张社强李帅胡海涛(74)专利代理机构郑州银河专利代理有限公司41158专利代理师黄洪涛(51)Int.Cl.C12N5/071(2010.01)C12N13/00(2006.01)C07K16/00(2006.01)C12M3/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺(57)摘要本发明提供一种使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，属于生物工程技术领域，本发明细胞生长状态更优，BioSep工艺可维持更高的活细胞密度(VCD)和活率(VIA)，直至D30培养结束时，VCD约为50×106cells/mL，VIA约为90％，ATF工艺培养至D30时，VCD约为30×106cells/mL，VIA约为80％，消除了目标产物的截留问题；BioSep工艺反应器内抗体浓度与收获液抗体浓度始终保持一致(相差5％以内)，产物截留率几乎为0％，而ATF工艺抗体截留率不断升高，直至结束培养时收获液中抗体浓度仅为反应器内的50％，产物截留率达到50％，提高产量。CN115710571ACN115710571A权利要求书1/1页1.一种使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、准备种子细胞；细胞株源自中国仓鼠卵巢细胞，即为CHO细胞，可表达特定的目标抗体产物；步骤2、将步骤1中的种子细胞放入生物反应器培养，获得目标产物；具体的操作步骤如下：步骤2.1、生物反应器的准备，生物反应器中设置声波截留系统，同时配备天平和蠕动泵；步骤2.2、控制反应器内的反应条件，同时设置搅拌装置对反应器内的培养基进行搅拌；步骤2.3、配置培养基；步骤2.4、将步骤2.3中的培养基植入反应器中和步骤1中的种子细胞进行培养，并进行灌流和放流操作，以得到目标产物。2.根据权利要求1所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述步骤2.2中，使用碳酸氢钠溶液与二氧化碳气体由反应器自动控制pH在6.30～7.50范围；以培养基过夜通纯净空气后的溶解氧DO校准为100％，DO设置范围为15％～80％；DO由反应器自动控制通氧气流量控制，培养起始使用大孔径气体分散器通氧气，适时改用小孔径气体分散器通氧气，起始培养温度为37℃，D3～D7改为34℃。3.根据权利要求1所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述搅拌装置包括电机、与电机的输出端连接的连接轴、位于连接轴上的桨叶。4.根据权利要求1所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述步骤2.3中，采用两种培养基：基础培养基和生产培养基，基础培养基AdvancedTM，额外添加1～5g/LP188；生产培养基AdvancedCHOFeed，V:V＝88:12～98:2，额外添加1～5g/LP188；两种培养基中的AdvancedTM是将生产商提供的培养基浓缩0.8～1.5倍配制。5.根据权利要求1所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述步骤2.4中，D1～D4开启灌流并适时切换为生产培养基；灌流速率为0.5～2.0RV/day；适时开启放流控制细胞密度，放流速率为0.1～0.3RV/day；通过流加葡萄糖溶液控制反应器内糖浓度，将糖浓度控制0.5～8g/L；培养30天结束，获得目标产物。6.根据权利要求1所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述步骤1的具体操作步骤如下：步骤1.1、细胞复苏后，每2～5天传代，传代接种密度为0.3～1×106cells/mL；培养于二氧化碳摇床中，使用培养基为CDCHOFusion培养基；步骤1.2、至接种反应器前2～5代，将培养基更换为AdvancedTM培养基，传代接种密度为0.6～1.4×106cells/mL；培养于二氧化碳摇床中。7.根据权利要求6所述的使用声学截留装置灌流培养细胞生产抗体的工艺，其特征在于，所述步骤1.1中的二氧化碳摇床的转速80～150rpm，振幅50～100mm，培养温度37℃，二氧化碳浓度5％；步骤1.2中的二氧化碳摇床的转速