田鼠巴贝斯虫的体外增殖.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109715200A(43)申请公布日2019.05.03(21)申请号201780057361.1(74)专利代理机构北京英赛嘉华知识产权代理(22)申请日2017.09.18有限责任公司11204代理人王达佐洪欣(30)优先权数据62/396,6972016.09.19US(51)Int.Cl.62/506,4292017.05.15USA61K39/018(2006.01)C12N1/10(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N1/00(2006.01)2019.03.18(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2017/0520752017.09.18(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/053432EN2018.03.22(71)申请人富勒实验室地址美国加利福尼亚州(72)发明人李·富勒权利要求书2页说明书12页附图2页(54)发明名称田鼠巴贝斯虫的体外增殖(57)摘要本文公开了用于田鼠巴贝斯虫和类田鼠巴贝斯虫物种的持续体外增殖的方法。该方法包括在包含宿主红细胞的培养基中于存在抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体来源的情况下孵育田鼠巴贝斯虫。在一个实施方案中，抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体的来源基本上不含IgG抗体。在一个实施方案中，补体来源是分泌补体的细胞或细胞系。CN109715200ACN109715200A权利要求书1/2页1.用于田鼠巴贝斯虫的体外增殖的方法，所述方法包括在包含宿主红细胞的培养基中于存在补体来源和抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体来源的情况下孵育田鼠巴贝斯虫。2.如权利要求1所述的方法，其中使所述田鼠巴贝斯虫持续增殖一次传代以上。3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述田鼠巴贝斯虫持续增殖至少200小时。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体来源基本上不含IgG抗体。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体来源来自与所述宿主红细胞相同的物种。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述补体来源包括与所述宿主红细胞共培养的细胞或细胞系，并且其中所述细胞或细胞系分泌补体至所述培养基中。7.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞或细胞系选自：鼠PD388D1、仓鼠NIL-8胚胎成纤维细胞、balb/c3T3成纤维细胞、肺泡II型上皮细胞A549、犬DH82、人THP-1、人HL60、人HeLa229、HSB-2淋巴细胞性白血病和单核细胞性白血病细胞系。8.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞或细胞系是选自以下的哺乳动物细胞或细胞系：人THP-1、人HL60、人HeLa229、HSB-2淋巴细胞性白血病和单核细胞性白血病细胞系。9.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞或细胞系源自选自THP-1、HL60或AML-193的人单核细胞/巨噬细胞谱系。10.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞或细胞系源自人内皮细胞、人肝细胞、人胃肠道细胞、人上皮细胞、人肺泡细胞、鼠PD388D1、仓鼠NIL-8胚胎成纤维细胞、BALB/c3T3成纤维细胞或肺泡II型上皮细胞A549。11.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞或细胞系是外周血单核细胞。12.如权利要求6至11中任一项所述的方法，其中所述细胞或细胞系使用transwell系统与所述宿主红细胞一起共培养或分别培养。13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述IgM抗体来源选自：脾脏淋巴细胞、B细胞、浆细胞、成浆细胞和杂交瘤。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述补体来源外源性地添加至所述培养基。15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述补体来源通过自动装置添加。16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗田鼠巴贝斯虫IgM抗体是多克隆的或单克隆的。17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中田鼠巴贝斯虫的倍增时间为约12小时至约24小时。18.用于使田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫持续体外增殖的方法，所述方法包括在包含宿主红细胞的培养基中于存在补体来源和抗田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫IgM抗体来源的情况下孵育所述田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫。19.如权利要求18所述的方法，其中所述田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫选自广义田鼠巴贝斯虫、杆状巴贝斯虫或“安妮泰勒虫”(西班牙犬类病原体)。20.如权利要求18至19中任一项所述的方法，其中所述抗田鼠巴贝斯虫相关的血寄生2CN109715200A权利要求书2/2页虫IgM抗体是多克隆的或单克隆的。21.如权利要求18至20中任一项所述的方法，其中田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫的倍增时间为约12小时至约24小时。22.包含田鼠巴贝斯虫或田鼠巴贝斯虫相关的血寄生虫