【精编医学资料】MTT法检测细胞活力讲解.pptx

MTT法检测细胞活力MTT法目的和意义原理贴壁细胞操作步骤4.每孔参加10ulMTT溶液〔5mg/ml即0.5%MTT〕继续培养4h。假设药物与MTT能够反响可先离心后弃去培养液小心用PBS冲2-3遍后再参加含MTT的培养液。5.终止培养小心吸去孔内培养液。6.每孔参加100ul二甲基亚砜〔置摇床上低速振荡10min使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔〔培养基、MTT、二甲基亚砜〕对照孔〔细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜〕悬浮细胞操作步骤：药物的配制MTT的配制实验结果统计学处理实验结果统计学处理举例本卷须知实验前应明确的问题2.药物浓度的设定。一定要多看文献参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否那么可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3.时间点的设定。在不同时间点的测定OD值输入excel表最后得到不同时间点的抑制率变化情况画出变化的曲线曲线什么时候变得平坦了〔到了平台期〕那个时间点应该就是最好的时间点〔因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显〕。4.培养时间。100ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说很难维持68h如果营养不够的话细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止影响结果我们是在48h换液的。5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力不能测定细胞绝对数。做MTT时尽量无菌操作因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。7.实验时应设置调零孔对照孔加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜不同的是对照孔加溶解药物的介质而加药组参加不同浓度的药物。8.防止血清干扰。用含15％胎牛血清培养液培养细胞时高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加会试验敏感性。因此一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。在呈色后尽量吸净培养孔内剩余培养液。关于细胞的接种(铺板)如何去除上清参加DMSOOD值的测定谢谢观看内容总结