【精编医学资料】分解尿素的细菌的分离.pptx

课题2土壤中分解尿素的细菌的别离与计数一、课题背景4、课题目的一.研究思路1、实例：2、实验室中微生物的筛选原理：15.0g15.0g15.0g6、怎样证明此培养基具有选择性呢？1.稀释涂布平板法〔活菌计数法〕⑴原理：在稀释度足够高时微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵计算方法：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数106的培养基中得到以下两种统计结果。1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板统计的菌落数为230。2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板统计的菌落数分别为21、212、256该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为结果。你认为哪位同学的结果更接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要如何改进？小结①为使结果接近真实值可将同一稀释度的稀释液涂布到三个或三个以上的平板中培养。②为了保证结果准确一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数计算出菌落平均数③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。2、显微镜直接计数法：设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度。实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。小结：通过这个事例可以看出实验结果要有说服力对照的设置是必不可少的。二.实验的具体操作㈠.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右再取样将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。㈡.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行◆别离不同的微生物采用不同的稀释度为什么别离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释范围相同吗？㈣.取样涂布㈤.微生物的培养与观察◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板那么说明稀释操作比较成功并能够进行菌落的计数如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大说明试验不精确需要重新实验。微生物的培养与观察三.结果分析与评价P251.通过对照实验假设培养物有杂菌污染菌落数偏高；假设培养物混入其他氮源那么菌落形态多样菌落数偏高难以选择出分解尿素的微生物。2.稀释操作是否成功：如果得到了2个或2个以上的菌落数在30—300的平板那么说明稀释操作成功。同一稀释倍数的三个重复组的菌落数不能相差悬殊如相差较大表示实验不精确要重新实验。四、操作提示五.课外延伸本课题知识小结:1.使用选择培养基的目的是〔〕A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素3.以下说法不正确的选项是〔〕A.科学家从70－80度热泉中别离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比土壤中的微生物数量最大种类最多。4.为培养和别离出酵母菌并淘汰杂菌常在培养基中参加〔〕A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质C.青霉素类药物D.高浓度食盐5、以下表达错误的选项是[]A．因为土壤中各类微生物的数量不同所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行别离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释范围不同C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30—300的平板才说明稀释操作比较成功并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落根据细胞生存所需物质的种类和数量用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产组分和含量相对固定;本钱低缺点：缺少某些成分不能完全满足体外细胞生长需要。天然培养基有血清、血浆、和组织提取液〔如鸡胚和牛胚浸液〕。优点：营养