【精编医学资料】免疫细胞功能检测技术.docx

最新各类医学考试课程联系QQ58441453第十五章免疫细胞功能检测技术免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞大致可分为两类一类能识别特异性抗原一旦被激活则显示出特异性应答的功能主要指淋巴细胞群包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；另一类能捕获抗原处理抗原以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。测定这些细胞功能可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。体内试验主要是进行迟发型超敏反应借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。一、T细胞功能检测T细胞具有多种免疫生物学功能如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体对特异性抗原或丝裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。据此建立了一系列检测T细胞功能的体内和体外试验。（一）T细胞增殖试验1.原理：T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后细胞增殖并转化为淋巴母细胞。因此淋巴细胞增殖反应又称淋巴母细胞转化。2.刺激物：植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌等。3.方法学：检测T细胞增殖反应的方法有：（1）形态学检查法：运用普通光学显微镜简便易行。缺点是依靠肉眼观察形态学变化判断结果易受主观因素影响重复性和准确性较差。（2）3H-TdR掺入法：敏感性高客观性强重复性好但需一定设备条件及存在放射性核素污染问题。（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法但操作简便无放射性污染。较常采用。（二）T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后分泌各种细胞因子可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术通过对于T细胞分泌细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平以反映T细胞功能。（三）T细胞介导的细胞毒试验常选用可传代的已建株的人肿瘤细胞与待检淋巴细胞混合观察肿瘤细胞杀伤的情况。是评价机体细胞免疫水平的常用指标特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力常作为判断预后和观察疗效的指标之一。（四）体内实验正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后如用相同的抗原做皮肤试验常可出现阳性的迟发型超敏反应。目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染（结核、麻风等）和细胞免疫缺陷等疾病也常用于观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等。1.特异性抗原皮肤试验：常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。其他皮试抗原还有白色念珠菌素、皮肤毛癣菌素、腮腺炎病毒等。受试者对所试抗原过去的致敏情况直接影响试验结果。若受试者从未接触过该抗原则不会出现阳性反应因此阴性者也不一定表明细胞免疫功能低下。为避免判断错误往往需用两种以上抗原进行皮试综合判断结果。2.PHA皮肤试验：将定量PHA注射到受试者前臂皮内可非特异性刺激T细胞发生母细胞转化呈现以单个核细胞浸润为主的炎性反应。PHA皮肤试验敏感性高比较安全可靠临床常用于检测机体的细胞免疫水平。二、B细胞功能检测B细胞主要产生Ig参与机体体液免疫应答B细胞功能低下或缺乏者对外源性抗原刺激的应答能力减弱或缺陷特异性抗体产生减少或缺如。因此B细胞功能试验方法有受试者血清Ig含量检测和体外B细胞增殖和产生抗体能力检测等。（一）B细胞增殖试验：原理与T细胞增殖试验相同但刺激物不同小鼠B细胞可用细菌脂多糖（LPS）作为刺激物人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等刺激。（二）溶血空斑试验1.原理：将SRBC免疫的小鼠脾脏（或家兔淋巴结）制成单个细胞悬液与SRBC在琼脂糖凝胶内混合后倾注于小平皿或玻片上。脾细胞中的抗体生成细胞释放抗SRBC抗体使其周围的SRBC致敏在补体参与下可将SRBC溶解形成肉眼可见的溶血空斑。每一个空斑中央含一个抗体形成细胞空斑数目即为抗体形成细胞数。空斑大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少。2.方法学（1）经典溶血空斑形成试验：用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。可分为直接法和间接法。直接法所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞其他类型的Ig由于溶血效应较低不能直接检测；间接法即在小鼠脾细胞和SRBC混合时再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig）使抗体产生细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物此时能活化补体导致溶血。上述直接法和间接法都只能检测抗RBC抗体的产生细胞而且需要事先免疫难以检测人类的抗体产生情况。（2）被动溶血空斑试验：是指抗体形成细胞产生的Ig与SRBC上的抗原结合在补体参与下出现溶血反应。方法是将吸附有