最新精编医学专题—细胞的形态.ppt

IdentificationofculturedadultratRGCs.Culturedcellswereco-labeledwithanti-Thy-1antibody(A)anti-NF-Lantibody(B)andDAPI(C).(D)Adigitallymergedimagesimultaneouslyrepresentsallthreefluorescentlabels.(E)Thecorrespondingphase-contrastimage.免疫荧光染色法免疫荧光的染色(rǎnsè)步骤正常细胞(xìbāo)和组织的培养体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜因此培养在有胶原的底物上可能(kěnéng)利于生长另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PH、Ca2+含量和温度向培养基中加入表皮生长因子均有利于表皮细胞生长。表皮细胞培养1、取材：外科植皮或手术残余皮肤(pífū)小块早产流产儿皮肤(pífū)更好取角化层薄者切成0.5－1平方厘米小块。2、置0.02%EDTA中室温5分钟。3、换入0.25%胰蛋白酶中4℃过夜。4、分离：取出皮块用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。5、取出表皮剪成更小的块后置0.25%胰酶中37℃30—60分钟。6、反复吹打制成悬液。7、培养：用80目不锈钢纱网滤过后低速离心吸去上清。8、直接加入培养基（Eagle加20%小牛血清）制成细胞悬液接种入培养瓶CO2温箱培养。第八页共七十四页。CulturedMouseMammaryEpithelialCells神经(shénjīng)胶质细胞培养获取脑组织后仔细剥除脑膜、血管和纤维成分置Hanks液中漂洗一、二次。2、置于30—50倍体积的Hanks液中此时脑组织比较柔软反复吹打即制成细胞悬液。3、把悬液注入离心管室温中直立5—10分钟后细胞或细胞团快自然下沉脂肪等杂物易漂浮可吸除上层、反复二、三次即可排除脂肪成分和其它碎块并获较多细胞成分。4、在沉降物中加入适量培养液通过纱网过滤计数并调整细胞密度。5、接入培养瓶或皿中置5%CO2温箱中培养。该细胞适应环境过程较长接种后贴壁较慢。贴壁后短期内也可能不见细胞分裂现象然而一旦生长后即能迅速进入旺盛的增殖(zēngzhí)状态。细胞传代可以0.25%胰酶消化处理。CulturedneuronCulturedmicroglia大鼠肝细胞的培养(péiyǎng)(成年)3、用含0.05%胶原酶的灌流液(预灌流液中加入5mmol/LCaCl20.05%胶原酶)继续灌流10分钟。4、将肝叶剪下将消化好的肝细胞轻轻刮下获得的肝细胞悬液离心(líxīn)(600r/min)三次每次2分钟5、然后重新悬浮于WE培养基中(含10%血清Insulin0.2U/mlL-Glutamine0.292mg/ml100nMdexamethasone)。6、IsolatedcellswereplatedoncollagentypeI-coateddishesinmediumIconsistingofWilliams‘mediumE。HepatocyteIsolationandCultureHepatocyteswereisolatedfromtheliveroffedmaleBALB/cmice(22-25g)byusingthetwo-stepcollagenaseperfusionmethod.Aftertheinductionofanesthesiawithpentobarbitalsodium(400mg/kgip)theperitonealcavitywasopenedandtheliverwasperfusedinsituviatheportalveinfor4minat37°Cwithcalcium-freeHEPESbufferandfor7minwithHEPESbuffercontaining45mg/100mlcollagenaseD(Boehringer-MannheimLavalQCCanada)and135mg/100mlCaCl2.Theperfusionratewassetat5ml/minforbothsolutions.Thecellswereusedonlyifcellv