最新精编医学专题—红细胞免疫功能与其测定方法.ppt

红细胞免疫(miǎnyì)功能及其测定方法在肿瘤的发生发展过程中免疫功能起着重要的作用过去的观点认为免疫功能主要和白细胞有关而红细胞在其中所起的作用一直未受重视。1981年siegel提出了红细胞免疫系统的新概念开辟了机体免疫功能研究的新纪元。红细胞作为人体血液有形成份的主要组成部分与肿瘤细胞的接触机会(jīhuì)比其他细胞要大1000倍。红细胞可以通过促吞噬作用、清除循环免疫复合物(CIC)、效应细胞样作用及对淋巴细胞和细胞因子的调控作用来达到抑制肿瘤的生长和转移的作用。在正常情况下红细胞免疫和白细胞免疫(如T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞)在机体内相互联系、密切配合、协同作战识别和清除肿瘤细胞共同维持机体内环境的平衡和生物功能的稳定。1红细胞与其它免疫反应(fǎnyìng)细胞的比较2红细胞的免疫(miǎnyì)功能粘附的复合物较悬浮于血浆中游离的复合物更易被吞噬。某些病毒在体内也能粘附于红细胞从而被吞噬消灭。免疫粘附可以增强吞噬作用4～5倍。红细胞还能阻止癌细胞在循环中播散因在外周血中癌细胞遇到红细胞比遇到白细胞的机会多500～1000倍。当癌细胞表面结合有抗体与补体时则可通过红细胞表面的C3b受体使癌细胞粘附于红细胞故容易被吞噬细胞捕捉与吞噬从而防止癌细胞的转移(zhuǎnyí)与扩散。红细胞还有吞噬细胞样的功能因为在其细胞膜表面具有过氧化物酶该酶是典型的溶酶体酶它可起着巨噬细胞样的杀伤作用。2.2红细胞的免疫(miǎnyì)粘附作用2.3防御(fángyù)感染3红细胞免疫功能异常(yìcháng)与疾病目前认为原发性癫痫和银屑病的发病也与自身免疫有关。郭峰等曾观察到这两种疾病患者的红细胞免疫功能的变化与SLE等其它自身免疫病患者是一致的。另外再生障碍性贫血的患者其红细胞的免疫粘附作用降低可能是由于患者造血功能障碍所产生的红细胞数量少而且质量低劣致使红细胞膜上的C3b受体生成不足。慢性布氏菌病患者其红细胞免疫功能亦降低致使清除(qīngchú)感染因子的能力减弱这种现象可能是引起该病经久不愈的原因之一。4红细胞免疫功能(gōngnéng)的检测及其临床意义意义：RBC-C3bR花环率和RBC-IC花环率可作为红细胞天然免疫粘附功能的指标。（1）若两项指标都低下判为原发性红细胞免疫功能低下为红细胞膜C3b受体受到破坏或遗传基因缺陷及其他影响所致。（2）若RBC-C3bR花环率降低而RBC-IC花环率增高则为继发性红细胞免疫功能低下是由于红细胞CR1上免疫复合物或补体调理的抗原量增加所致。（3）若这两项指标都上升判断(pànduàn)为红细胞天然免疫功能亢进与紊乱。4.2红细胞CR1数量(shùliàng)的测定4.2.2红细胞CR1流式细胞仪测定方法具体操作程序：在编号试管中分别加冷PBS50µl加入鼠抗人红细胞CR1(CD35)单抗1.5µl及待测枸橼酸钠抗凝新鲜血0.5µl充分吹打混匀置室温下避光30min。加入PBS液2ml1500r/min离心5min弃上清液；加入荧光素标记(biāojì)的第二抗体—羊抗鼠IgG-FITC1µl吹打混匀置室温下避光30min；再加入PBS液2ml充分混匀、洗涤1500r/min离心5min弃去上清夜后加入PBS300µl混匀后置流式测试管中严格按照流式细胞仪操作程序测定样品和对照品在计算机屏幕上显示或记录各待测标本红细胞平均荧光强度。意义：红细胞CR1数量流式细胞仪测定结合CR1基因多态性及红细胞CR1活性测定对临床上红细胞免疫功能缺陷与亢进(kàngjìn)分型更为客观对临床辅助诊断及疗效指标都具有重要应用价值。4.2.3红细胞CR1单抗免疫酶联法（ELISA法）5正常(zhèngcháng)红细胞与异常红细胞毛细管电泳分离样品制备1)正常红细胞悬浮液用含6%葡萄糖的0.1mol/LpH7.4的磷酸盐缓冲液稀释红细胞通过血球板计数法确定细胞浓度为1.86×107个/mL。2)异常红细胞悬浮液取上述浓度红细胞0.2mL与H1N1甲亚型流感病毒0.02mL充分混合(hùnhé)常温(25℃)下反应1ｈ。电泳条件每天运行前用0.1mol/LHCl、0.1mol/LNaOH、水、缓冲液分别洗柱3、6、3、3min；每轮运行前均用0.1mol/LNaOH、水、缓冲液分别洗柱3、1、1min；结束实验(shíyàn)时用0.1mol/LHCl、0.1mol/LNaOH和水分别洗柱5、10、5min最后将毛细管内壁吹干保存。正极进样负