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第三章灭菌(mièjūn)和消毒消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用其实它们的含义是有所不同的。消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体(wùtǐ)表面和内部的病原菌营养体的方法而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物使之呈无菌状态。一、物理(wùlǐ)方法1)干热灭菌法a.灼烧灭菌法:利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠灭菌迅速但易焚毁物品所以使用范围有限只适合于接种针、环、试管(shìguǎn)口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。b.干热空气灭菌法:这是实验室中常用的一种方法即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中升温至160℃恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。2)湿热灭菌法在同样的温度下湿热灭菌的效果比干热灭菌好这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高容易变性(biànxìng)。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力从而加速蛋白质变性而迅速死亡。a.巴氏消毒法:有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量如牛奶、酱油、啤酒等所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物这样既保持食物的营养和风味又进行了消毒保证了食品卫生。该法一般在62℃30分钟即可达到消毒目的(mùdì)。此法为法国微生物学家巴斯德首创故名为巴氏消毒法。b.煮沸消毒法:直接将要消毒的物品放入清水中煮沸15分钟即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸则效果更好。此法适用于注射器、毛巾(máojīn)及解剖用具的消毒。c.间歇灭菌法:上述两种方法在常压下只能起到消毒作用而很难做到完全无菌。若采用间歇灭菌的方法就能杀灭物品中所有的微生物。具体做法是:将待灭菌的物品加热至100℃15~30分钟杀死其中的营养体。然后冷却放入37℃恒温箱中过夜让残留的芽孢(yábāo)萌发成营养体。第2天再重复上述步骤三次左右就可达到灭菌的目的。此法不需加压灭菌锅适于推广但操作麻烦所需时间长。d.加压蒸汽(zhēnɡqì)灭菌法:这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品(wùpǐn)放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121℃。在这种情况下微生物(包括芽孢)在15~20分钟便会被杀死而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品则应适当延长灭菌时间。在加压蒸汽灭菌中要引起注意的一个问题是在恒压之前(zhīqián)一定要排尽灭菌锅中的冷空气否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系这样会大大降低灭菌效果。3)影响灭菌的因素a.不同(bùtónɡ)的微生物或同种微生物的不同(bùtónɡ)菌龄对高温的敏感性不同(bùtónɡ)。多数微生物的营养体和病毒在50~65℃10分钟就会被杀死;但各种孢子、特别是芽孢最能抗热其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌要在121℃12分钟才被杀死。对同种微生物来讲幼龄菌比老龄菌对热更敏感。b.微生物的数量多少(duōshǎo)显然会影响灭菌的效果数量越多热死时间越长。c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般地讲蛋白质、糖或脂肪存在则提高抗热性pH在7附近抗热性最强偏向两极则抗热能力下降而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响;固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。4)灭菌对培养基成分的影响a.pH值普遍下降。b.产生混浊或沉淀这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca2+与PO43-化合就会产生磷酸钙沉淀。c.不少培养基颜色(yánsè)加深。d.体积和浓度有所变化。e.营养成分有时受到破坏。2、辐射(fúshè)3、过滤(guòlǜ)二、化学(huàxué)方法消毒剂在低浓度时也能杀菌。由于消毒防腐剂没有选择性因此对一切活细胞都有毒性不仅能杀死或抑制(yìzhì)病原微生物而且对人体组织细胞也有损伤作用所以只能用于体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。常用的化学消毒剂有:石碳酸、来苏水(甲醛溶液)、氯化汞、碘酒、酒精等。三、常用(chánɡyònɡ)消毒剂常用(chánɡyònɡ)杀菌剂特性稳定性特定区域或条件(tiáojiàn)下的推荐杀菌剂防止膜形成无腐蚀橡胶皮带内容(nèiróng)总结