最新精编医学专题—小肠平滑肌生理特性的观察与分析.doc

实验一小肠平滑肌生理特性的观察与分析一实验目的1.学习哺乳动物离体肠标本制备及灌流方法。2.观察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对舒缩活动的影响。二、实验原理消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样也具有兴奋性、传导性和收缩性有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低收缩慢伸展性大具有紧张性收缩对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后置于适宜的溶液中观察其收缩活动及环境变化的影响观察分析上述生理特性。三、实验材料1、实验动物：家兔2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器(量程为25g以下)、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/LNaOH溶液、lmol/LHCl溶液、2%CaCl2溶液。四、实验方法和步骤1、标本制备流程2、仪器安装及调试3、观察项目现象及解释1、标本制备流程：①击昏家兔→②剖开腹腔快速取出肠管→③制作离体肠标本①击昏家兔：用木槌猛击兔头枕部使其昏迷。②剖开腹腔快速取出肠管：立即剖开腹腔找出胃幽门与十二指肠交界处快速取长20~30cm的肠管先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去置于供氧台氏液中轻轻漂洗把肠内容物基本洗净。③制作离体肠标本：将肠管分成数段每段长2-3cm两端各系一条线保存于供氧的38℃左右的台氏液中2、仪器安装与调试实验安装（如图）：恒温水浴锅控制加热恒温工作点定在38℃。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接将肠段一端系在通气管钩上另一端与张力换能器相连。控制通气量使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。仪器调试：BL-410系统的使用选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数t→DC高频滤波F→30Hz显速→4.00s/div增益→100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始”按钮调节参数至波形幅度、密度适当待收缩曲线稳定后单击记录按钮。观察项目现象及解释1．待标本稳定后记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。2．乙酰胆碱的作用用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液加入新鲜温台氏液由此反复3次以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱使之达到无效浓度待小肠运动恢复后进行下一项。3．肾上腺素的作用按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽内1~2滴观察小肠运动的反应。当效果明显后立即更换台氏液。4．氯化钙的作用加2%CaC12溶液2~3滴入灌流浴槽内观察其反应效果明显后迅速冲洗。5．盐酸的作用加1~2滴1mol/LHCl溶液入浴槽内观察其反应。6．氢氧化钠的作用在(5)基础上加等容量的1mol/LNaOH溶液入浴槽内观察其反应。按上述方法更换台氏液反复冲洗。7．温度的影响将浴槽内台氏液放出注入25℃台氏液观察平滑肌收缩有何改变当效应明显后再换入38℃台氏液持续一段时间后再换入42℃台氏液观察收缩活动的变化（亦可根据室温的具体情况选做其中的一项）。五、注意事项1.实验过程中必须保证标本的供氧(通气)及浴槽内台氏液的恒温(38℃)以维持标本活性。2.灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。3.放大器零点调好后不要再移动旋钮以免影响基线。4.上述各药液加入的量系参考数据效果不明显者可以添加。5.每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液并冲洗多次以免平滑肌出现不可逆反应。6．各项处理必须有处理标记。六、相关知识家兔小肠平滑肌以胃幽门与十二指肠交界处的肠管活动最好对生物化学因素也较敏感所以选取用此处肠管作标本。七、作业1．从记录曲线中观察比较小肠平滑肌与心肌、骨骼肌的收缩特性有何不同?说明其原理。2．通过观察分析记录曲线变化阐明各项处理引起的收缩频率、收缩强度和张力变化的机理。3．结合本章的实验内容谈谈观察与思维在实验研究中作用与体会。八、实验讨论：1、正常情况下我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩但其节律性很不规则。小肠平滑肌自律性产生的离子基础尚未完全清楚目前认为它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关当钠泵的活动暂时受抑制时膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时膜的极化加强膜电位便又回到原来的水平。2、在浴槽中加入0.01%乙酰胆碱（Ach）2滴（约0.2ml）后可见离体肠管活动增强描记曲线出现收缩频率变快幅度增加。出现上述现象的机理目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2+的内流有关。乙酰胆碱可与肌膜上的M受体结合使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道另一类为特异性受体活化Ca2+专用通道。