实验六 重组DNA分子的转化.doc

实验六：重组DNA分子的转化
实验目的
掌握将外源DNA分子导入感受态细胞的技术
二．实验原理
转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传型与表型的改变。
三．实验材料
1．水浴锅、离心机、超净工作台、恒温培养箱、各式移液器、培养皿；
2.LB液体培养基、LB固体培养基、氨苄青霉素。
3.DNA样品：重组DNA分子pCR2.1-Rv1791。
四．实验步骤
①5μl连接产物加入到感受态细菌中，置冰上10min。
②42℃水浴90s进行热休克（不可晃动），冰浴5-10min。
③加入800μl不含抗生素的LB，37℃，250r/min，1hr。
④3000rpm，4min，轻轻弃掉500μl上清（留上清的量视平板干燥程度）。
⑤加入40μl(40mg/ml)X-gal、2μlIPTG（400mmol/ml）和8μlAmp+(100mg/ml)抗生素涂布平板，37℃培养过夜。
五．实验结果

本次实验所得平板上有蓝白菌落相对较多、切分布均匀。但部分菌落黏粘在一起，说明涂布时不够均匀，操作技术有待提高。其中白色菌落为导入了重组DNA分子pCR2.1-Rv1791，蓝色菌落未导入重组DNA分子pCR2.1-Rv1791。
六．思考题
重组基因的导入方法有哪些?
动物细胞：显微注射法:
指在显微镜下，将DNA指在显微镜下，将DNA由细胞玻璃针直接注入细胞。可以将DNA直接注入核内而减少溶酶体对外源DNA的降解，有助于基因的整合与表达。适用于多种贴壁生长细胞及悬浮生长细胞，包括原代及传代细胞、胚胎细胞等。;
微生物：Ca离子感受态细胞;
植物：农杆菌转化法，基因枪法(首先利用微小的金、钨等金属颗粒相DNA吸附，然后在高压作用下将DNA伴随金颗粒高速进入由于微粒的直径一般在0.5-0.9Fm之间，远小于细胞，因此可直接将DNA导入细胞质中，这种方法能有效地使DNA在活体组织、贴壁细胞和悬浮细胞中表达。由于该方法的高转染效率，通常只得少量DNA即可获得外源基因的表达并激发有效免疫应答。)，花粉管通道法