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食品中糖的测定方法 对于糖的测定方法有很多,大致可分为三类 物理法,(1.旋光法,??2.折光法,??3.比重法,) 物理化学法,(1.点位法,2极普法,3.光度法,4.色谱法) 化学方法,(1.斐林氏法.2.高锰酸钾法.3.碘量法.4.铁氰化钾法.5.蒽铜比色法.6.咔唑比色法) 共计三大种,在测定其他碳水化合物时,往往是使其水解为糖再进行测定。 一.??总糖的测定 食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为 还原性的单糖的蔗糖(水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖),麦芽糖(水解后为2分子葡萄糖)以及可能部分水解的淀粉(水解后为2分子葡萄糖)。还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基(-CHO)或酮基(=C=O)。 测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础的。这些方法中,以各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。在这里我们主要给大家介绍铁氰化钾法,蒽铜比色法,斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反应复杂,影响因素较多,所以不如铁氰化钾法准确,但其操作简单迅速,试剂稳定,故被广泛采用。蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内,但要求检测液澄清,此外,在大多数情况下,测定要求不包括淀粉和糊精,这就要在测定前将淀粉,糊精去掉,这样就使操作复杂化,限制了其广泛应用。 (一)??铁氰化钾法 原理:样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质,在碱性溶液中能将铁氰化钾还原,根据铁氰化钾的 浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应为下: C6H12O6+6K3[Fe(CN)6]+6KOH→(CHOH)4?(COOH)2+6K4[Fe(CN)6]+4H2O 滴定终了时,稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。 2,试剂 1)1%的次甲基兰指示剂 2)盐酸(水解作用) 3)10%和30%的NaOH溶液 4)1%铁氰化钾(贮存特色瓶,临用前标定) 标定步骤 称蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→摇匀→65-70℃水裕15分钟→取出冷却→用30%NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1%铁氰化钾于锥形瓶中→加10%NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰1滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止,记录用量。 正式滴定比较滴定时少0.5ml糖液,煮沸1分钟,加指示剂一滴,再用糖液滴定至兰色褪去,计算铁氰化钾溶液的浓度。 A=(W?V)/(1000×0.95) A:相当于10ml铁氰化钾溶液的转化糖的量(克) V:滴定时消耗的糖液的体积 W:称取纯蔗糖的量 1000:稀释比 0.95:换算等数 3.操作方法 稀释10g→用100ml水作溶液→于250ml容量瓶→加20%醋酸铅10ml→至沉淀完为止→加10ml10%NA2HPO4→至不在产生沉淀为止→加水至刻度→过滤-取滤液50ml→于100ml容量瓶中→按铁氰化钾标定法进行转化,中和及滴定 计算糖含量 总糖(以转化糖计%)=(A×1000)/(W?V)×100?????????????????????????????? A:相当于10ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量, W:样品的重量 V:滴定时样液消耗的体积 4.实验应注意 (a)达终点时,过量的转化糖将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体,隐色体容量受空气中氧所氧化,很快又变 成指示剂的颜色。 (b)整个过程应在低温电炉上进行,滴定要速度,否则终点不明显 (c)糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛,生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物,其颜色深浅与溶液中糖的浓度 成正比,单、双糖等糖类都直接于试剂发生作用,因此不需要水解。 (二)蒽铜的比色法 原理:糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛,生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物,其颜色深浅与溶液中糖的浓 度成正比,可比色定量。 试剂 (1)??硫酸锌溶液:溶解500g化学纯硫酸锌于500ml水中 (2)??亚铁氰化钾溶液:溶解10.6g化学纯亚铁氰化钾于100ml水中 (3)??0.2%蒽铜试剂:溶解蒽铜0.2g于100ml95%硫酸中,置棕色瓶中冷暗处保存 (4)??0.1%葡萄糖液:准确称干燥葡萄糖0.1000g定容100ml 操作方法 (1)??标准曲线绘制 (2)??100ml容量瓶编号?? 沸水浴加热6分钟,取出冷却→用1cm比色杯→610nm测定吸光度→作出以吸光度为横坐标,糖液浓度为纵坐标的准 曲线 (3)样品测定 称10g样品→于100ml热水加入500ml容量瓶中-加硫酸锌5ml→沸水浴5分钟→取出再摇动下加亚铁氰化钾5ml,→冷却→定容500ml→过滤→吸滤液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀释液1ml,于比色管中→加1