心肌型脂肪酸结合蛋白的新近研究进展OK.doc

关于心肌型脂肪酸结合蛋白的新近研究进展
单位:天津北辰区宜兴埠医院
作者:苏忠旭（本文文责自负）
【摘要】急性心肌梗死（AMI）的发病率及死亡率均很高，现代治疗学认为，AMI发病后能迅速得到确诊并进行再灌注治疗，对于降低死亡率及改善预后十分重要。迄今为止,临床应用的检测指标如肌钙蛋白I(cTnI)、心肌型肌酸激酶同工酶（CKMB），在AMI发病后的早期（２h～４h）阳性率不高；肌红蛋白（MB）虽出现较早,但特异性较差。心肌型脂肪酸结合蛋白（heartfattyacidbindingprotein,H-FABP）是近些年推出的心肌标志物，受到业界重视，本文将对其性质、检测及在心肌损伤中的相关应用作出相应的论述。
【关键词】心肌型脂肪酸结合蛋白急性心肌梗死检测应用
特性
1.脂肪酸结合蛋白（FABP）是一种小分子蛋白质（相对分子量为15000），存在于机体多种组织细胞的胞浆中，主要担负着结合脂肪酸并调节其细胞内代谢的功能。按照组织特异性不同可以分为心肌型（H-FABP）、小肠型（I-FABP）、肝脏型（L-FABP）、脂肪细胞型（A-FABP）、脑细胞型（B-FABP）、肾脏型（K-FABP）、骨骼肌型（S-FABP）、牛皮癣相关性（PA-FABP）、表皮型（E-FABP）9种亚型[1]。
它们分布于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中,，在蛋白质序列上显示有很大的同源性［2］。种FABPs都有不同的表达模式，这些蛋白有多种功能，包括促进细胞摄取和运输脂肪酸，寻找参与特殊新陈代谢途径的脂肪酸，参与基因表达和细胞生长的调节。首先由Ockner等在1972年研究大鼠的小肠脂肪酸吸收的调节时，于肠粘膜发现的一族同源性的小分子细胞内蛋白质。分子量为12～16KD，广泛分布于哺乳动物的小肠、肝、脂肪、心、脑、骨骼肌等多种细胞中。在同一细胞中可分布多种FABPs，例如在小肠内皮细胞上存在两种不同FABPs，即L-FABP和I-FABP，二者具有29％的同源性。在植物中也发现有FABP。不同型FABP的序列有较大的同源性[3]。H-FABP是一种可溶性细胞质蛋白，分子量为14～15KD。它特异、大量存在于心肌组织中，约占心脏全部可溶性蛋白的4%-8%，正常人每克湿重心肌中含H-FABP约（0.52±0.06）毫克。H-FABP是一种酸性蛋白质，其等电点（pI）为5.1。人H-FABP的一级结构由132个氨基酸组成，其中还有多个苏氨酸和赖氨酸，缺少半胱氨酸，在其N末端有一个乙酰化的缬氨酸残基。心肌型脂肪酸结合蛋白能够与疏水性配体分子如长链脂肪酸、维生素（视黄醇）、视黄酸、某些有机阴离子等发生特异性结合，是关键的脂肪酸载体蛋白。它可将脂肪酸从细胞质膜向发生酯化和氧化的部位运输，从而进入线粒体的能量代谢体系之中，使脂肪酸在此氧化分解并最终生成三磷酸腺苷（ATP），并提供能量。H-FABP特异地存在于心肌组织中。正常人的血浆和尿中不含有H-FABP，或含量甚少。H-FABP的空间结构与其他亚型相似，都包括2个α螺旋与1个β折叠结构，其2个短α螺旋结构（αⅠ与αⅡ）由肽链N-末端的7个氨基酸组成，β折叠结构则由92个氨基酸构成，分为βA~J8个片层[3]。H-FABP与心肌细胞内作为能源的难溶性长链脂肪酸以及脂酰辅酶A（acyl-CoA）的疏水部分相结合，起着将上述物质从细胞质膜向脂化和氧化部位运输的作用。血流中乳糜微粒和极低密度脂蛋白释放出的脂肪酸通过细胞表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞内后，被H-FABP摄取并转运至线粒，从而进入能量代谢体系并最终生成三磷酸腺苷（ATP），为心肌收缩提供能量。
检测
1.夹心酶免法（SandwichELISA）
1997年Panteghini等［4］采用9FABP125单克隆抗体和鸡多克隆抗体联合HRP标记的鼠抗鸡IgY单克隆抗体，进行双抗体夹心ELISA法测定HFABP。本法批内CV＜15%，最低检出线0.5μg/L,与其他心肌、骨骼肌蛋白、肌红蛋白、肌浆球蛋白、肌钙蛋白无交叉反应。用该法测定35名健康人血清中HFABP水平为0.5μg/L～2.8μg/L，正常参考值上限为10μg/L。北京大学生命科学院率先在国内完成HFABPELISA法测定试剂的研制工作［5］。Tanaka等[6]建立了血浆和尿中的H－FABP竞争性酶免疫分析法，但测定需时较长，不适合临床应用。Wodwig等[7]建立了一步法ELISA，测定需时45min，其敏感性和特异性与Okhura等[8]的二步法ELISA一致。此两法现均有商品供应且已用于临床。
2.时间分辨免疫荧光测定法（TRIFMA）
时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是自80年代以来新发展起来的一种新型分析技术，与其它免疫分析技术相比，有其独特的优点。