NMDA受体与NOS在癌性疼痛吗啡耐受中的作用研究.doc

NMDA受体与NOS在癌性疼痛吗啡耐受中的作用研究
(中南大学湘雅三医院长沙410013)
黄晓玲黄东阎雪彬
目的制备一个简单有用的骨癌痛模型，并在此模型上模拟吗啡耐受产生，以探讨癌痛吗啡耐受是否与其他类型吗啡耐受有着相同的表现及机制。
方法第一部分：选用体重约18-20g的成年雄性C57BL/6小鼠40只，随机分为四组：实验组一：接种Lewis肺癌细胞2×106个(15只)；对照组一：接种相同数目加热灭活的Lewis肺癌细胞(5只)；对照组二：接种等容积的PBS液(5只)；对照组三：正常对照组，不予任何处理(5只)。接种容积均为10ul。术后7天始隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。术后第7、15、23天，双侧后肢X线摄片，评估肿瘤诱发的骨组织破坏程度。摄片后，取小鼠术侧后肢作HE染色观察骨质破坏情况。
第二部分：于接种后的第15天将模型小鼠完全随机分为模型吗啡组(M-Mor组)与模型盐水组(M-NS组)，另增正常小鼠20只完全随机分为正常吗啡组(N-Mor组)与正常盐水组(N-NS组)。每组10只，每天8:00和17:00皮下注射吗啡10mg/kg，连续7天，建立慢性吗啡耐受模型。对照组按体重给予等体积NS。从给药的第一天起，隔日上午给药后1h测撤爪反应的机械触痛阈值作为疼痛指标。第7天取腰段脊髓行NMDA-R1免疫组化检测和采用南京建成研究所的NOS试剂盒行脊髓NOS测定。
结果1）实验组自造模第10天始出现明显自发痛，接着表现为明显触诱发痛。术后23天放射学结果：术侧股骨下段骨髓腔消失，骨皮质中断、大块缺损。同时组织学可见肿瘤细胞充满骨髓腔，且穿破骨皮质向外生长，侵犯周围肌肉组织。行为学、放射学、组织学三方面均证实造模成功。
2）奇数天给药后1小时行为学测试：第1,3天注射吗啡后，N-Mor组机械触痛阈值均较N-NS组明显增大(P<0.05)；第5天仍增大(P<0.05)，但与第1,3天相比明显变小(P<0.05)；第7天与对照组相比，无统计学差异(P﹥0.05)。M-Mor组呈现类似改变，第1,3天机械触痛阈值与M-NS组相比明显增大(P<0.05)；第5天仍有差异(P<0.05)，但与第1,3天相比明显变小(P<0.05)；第7天无统计学差异(P﹥0.05)，产生耐受。
脊髓NMDAR1免疫组化检查和NOS测定结果，采用两样本T检验统计方法分析：M-Mor组、N-Mor组分别与N-NS组相比，脊髓NMDAR1数目增多、NOS活性增高（P<0.05）；M-NS组与N-NS组相比亦差异显著（P<0.05）；而M-Mor组与N-Mor组相比NMDA受体数量减少、NOS活性降低，(P<0.05)。
结论C57BL/6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞能成功制备骨癌痛模型，在此模型上模拟慢性吗啡耐受产生是可行的。脊髓NMDA-R1受体与NOS参与和介导了癌痛吗啡耐受的发展，在此过程中二者表达均上调。
关键词骨癌痛NMDA受体NOS癌痛吗啡耐受