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!"卷#期生物工程学报&’()!"*’)# #$$%年%月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+,-./#$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 分子标记辅助选择改良蜀恢!"#对白叶枯病的抗性 黄廷友李仕贵"王玉平黎汉云 (四川农业大学水稻研究所,成都2!!!%$) 摘要以含抗性基因3+#!和3+5的抗白叶枯病近等基因系DEFF2$为供体亲本,以不抗白叶枯病强恢复系蜀恢 4#8为轮回受体亲本,连续回交%代,自交!代,在分离世代用分别与3+#!和3+5紧密连锁的标记G63#51和+H!# 对目标基因和进行辅助选择,直至。在中选出株型、粒型、播抽期等农艺性状与蜀恢相 3+#!3+5FI%9#FI%9#4#8 似且G63#51和+H!#的扩增带型纯合的!$个单株,用!$$个E3HJ和!#$对KKE引物进行背景选择,决选出4个单 株,作为改良的蜀恢。抗性分析表明,这些改良的蜀恢株系对我国菌系和来自菲律宾的和均 4#84#8I!0I"H!H2 表现抗性,说明抗性基因已成功导入蜀恢4#8中并表达。同时对G63#51和+H!#在亲本间的多态性和选择的准确 性也进行了分析,结果显示这两个标记在亲本间的多态性明显,共显性;选择的准确率分别在"8L和1%L以上,可 以用其进行标记辅助选择。 关键词3+#!,3+5,抗白叶枯病,分子标记辅助选择,抗性鉴定 中图分类号M81文献标识码3文章编号!$$$0%$2(!#$$%)$#0$!4%0$4 白叶枯病(3+$/"(4($+&(*25+%67)(*25+%,3(()是辅助选择,将3+#!和3+5导入蜀恢4#8,达到改良 水稻的重要病害之一,它导致水稻大幅度减产和产其抗白叶枯病的目的。 量不稳定,同时也影响稻米品质。防治白叶枯病最 材料与方法 经济有效的措施是选育和种植抗病品种[!,#]。分子$ 标记辅助选择(+’(7.@(,-<,-N7-O,>>=>C7P>7(7.C=’B,$%$植物材料 +3K)是直接利用与目标基因紧密连锁的分子标记蜀恢4#8,四川农业大学水稻所新育成的优质、 [] 对其进行选择,是一种高效的抗病育种方法#O2。高配合力强恢复系,不抗白叶枯病;DEFF2$,国际水 目前在水稻分子图谱上定位了#$多个抗白叶枯病稻所以DE#5为背景育成的抗白叶枯病近等基因系 [] 基因8O",其中与3+#!和3+5紧密连锁的HIE标(*DQ>)(含3+#!、3+5、8+4和8+!%)及另外两个近等 [,] 记已经找到#!$。这使得用分子标记辅助选择改良基因系DEFF#!(含3+#!)和DEFF5(含3+5);DE#5, 水稻白叶枯病的抗性成为可能。作为感病对照。 本研究以抗白叶枯病水稻材料DEFF2$为供体$%"&’(分析 亲本,四川农业大学水稻研究所新育成的优质、高配$%"%$3+#!和3+5特异性扩增引物(表!)。 合力、强恢复系蜀恢4#8为受体亲本,利用分子标记 表$用于分子标记辅助选择的引物序列 )*+,-$.-/0-12-345*67-684365*67-69*88:8;-<8-,-2;:31346-8:8;*12-=-1-8;3!"#$%&’&#"(&)*+",-.>&)*+",,!&& +,-N7-I/-’<’>’<7H-=<7->7R@7B.7Q=BN7P?7B7J=>C,B.7E7S7-7B.7 G63#51!!4T?,.?.??,,???C??CC...?,?%T3+#!$)$.+E’B,(P%/+,!""# 4T?,.?.??C,,C.?,,,?,C?,,,%T +H!#!!4T,C.?,C.?,C.CC.,.?,??%T3+5—+3FU%/+,!""" 4TC?.C,C,,,,??.,CC.???%T *’C7:.+,.7BC=<’-?,B 收稿日期:#$$#0!$0$",修回日期:#$$#0!#0##。 基金项目:国家12%高技术发展与研究计划项目(*’)#$$!33#!!$1!)和教育部优秀博士论文基金(*’)#$$$45)。 "通讯作者。67(:120#101#8##22!;9,::120#101#8#2184;;0<,=(:(=>/=?@=0>.A#2%)B7C 生物工程学报卷 )DB), !"#"#遗传背景选择:根据!"#$%&&大学’’(图谱,种上测试毒力。将毒力稳定的菌种在2’1上于 从每条染色体上选)*对’’(引物(覆盖水稻染色体:CJ培养BC<,用灭菌蒸馏水配制成)E)*,/%&&KL7 )+,)-./0)和)**个(123引物(425、426、427、的菌悬液用以接种。采用人工剪叶法在分蘖盛期接 42(和428序列)进