ww兔的肝细胞生长因子(HGF)酶联免疫吸附测定试剂盒.pdf

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兔的肝细胞生长因子(HGF)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书

产品编号：E0047Rb
规格：96T
本试!剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

预期应用
本酶联免疫吸附测定试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定兔血清、血浆或其它相
关生物液体中HGF含量。

本试剂盒已提供的试剂
试剂名称数量试剂名称数量
96孔板(预包被)196孔板覆膜4
标准品(冻干)2标准品稀释液1×20ml
检测溶液A(绿色)1×120μl检测稀释液A(2x)1×6ml
检测溶液B(红色)1×120μl检测稀释液B(2x)1×6ml
TMB底物1×9ml终止液1×6ml
浓洗涤液(30x)1×20ml使用说明书1

本试剂盒未提供但需自备的设备及试剂
1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）
2、单道和多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期
所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检
测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存
于-20，避免潮湿。有效期为6个月。

实验原理
将HGF抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中依次加入标准品和标
本，其中的HGF与连接于固相载体上的抗体结合，洗板之后加入生物素化的HGF抗体，
将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入底物
(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的HGF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），
计算样品浓度。

标本的采集与保存
1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置30分钟或4过夜，然后
1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免
反复冻融。
2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-
81000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应
避免反复冻融。
3、其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-
80保存，但应避免反复冻融。
注意：
1、以上标本均需密封保存，4保存应小于1周，-20不应超过1个月，-80不应超
过2个月。
2、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
3、标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂准备
1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25)，试剂不能直接在37溶解。
2、标准品（冻干品）：每瓶标准品用标准品稀释液稀释至0.5mL，盖好后室温静置大
约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000pg/mL。准备7个稀释标
准品的EP管，每个EP管中加入300的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成
1,000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6
pg/mL，标准品稀释液（0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实
验请使用新的标准品溶液。

Tube12345678
pg/mL1,00050025012562.531.215.60

3、检测稀释液A及检测稀释液B：用6mL蒸馏水或去离子水将6mL浓检测液A及B
稀释至12mL，进行2倍稀释，稀释后的工作液不宜进行冷冻保存。
4、检测溶液A及检测溶液B：DetectionA及DetectionB在使用前请手甩几下或少时
离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100
稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算
好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2mL。
5、浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30
倍稀释。
6、底物溶液：请用灭菌的移液器吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容
器中剩余的底物应予丢弃，不要倒回TMB瓶中。
注意：
1、标准品请于临用前15分钟内配制。该标准品只能使用一次。
2、标准品的稀释不能直接在板中进行。
3、标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制，不能混
淆。混匀时要轻轻充分混匀，避免起泡。为保证实验结果的准确请使用微量吸管