色谱分析中归一化法、外标法、内标法的区别.doc

色谱分析中面积归一化法、外标法、内标法适用范围及优缺点简介
在色谱分析中，即我们常用的高效液相色谱分析（HPLC）和气相色谱分析（GC）分析中，进行分析时，通常采用三种方法：面积归一化法、外标法、内标法。这三种方法的适用范围及各自的优缺点是什么呢？在这里简单做一介绍。
1、归一化法。即在一定分析条件下，样品经过直接溶解，过滤等操作以后,直接进分析仪器检测，得到色谱图。通常用于粗略检查样品中的各出峰成分含量，用于定性和粗略的定量。
优点：与进样量准确度无关、与仪器和分析条件有关。
缺点：a.在此条件之下，所有有效组分必须出峰，且所有组分必须在一个分析周期内流出色谱峰；
b.定量计算必须先知道各成分的校正因子，校正因子的求出较麻烦。
2、易挥发性的油脂类化合物和混合性气体、液体，可用GC归一化法进行定量检测。例如食用油里面各成分的含量测定。
2、外标法。用待测组分的纯品作为对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号（即峰面积大小）相比较进行定量的方法。
优点：简便；只关注待测成分出峰，不需要所有成分出峰。
缺点：a.必须有被测组分的纯品作为标准对照物；
b.此方法准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。
3、内标法。选择样品中不含有的纯物质作为内标物加入待测样品中，以待测组分和内标物的响应信号（即峰面积大小）对比，对待测组分定量的方法。
优点：a.是一种比较准确的定量方法；
b.定量结果与进样量重复性无关（在色谱柱不超载范围内）；
c.只需要内标物与被测物出峰，达到一定的分离度即可；
d.常用于样品的GC定量检测以及微量成分含量检测；
缺点：配置较麻烦；内标物需要跟待测组分在同样条件下出峰，且分离度较好，所以选择合适的内标物比较困难。