实验八植物组织中游离氨基酸的分离鉴定.doc

实验八:植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
左哥

实验材料、器材
1、展层溶剂标准氨基酸溶液0.5%羧甲基纤维素钠溶液硅胶G粉0.5%茚三酮丙酮溶液
2、层析缸玻璃板
二、操作步骤
1、马铃薯提取液制备：30g去皮马铃薯，80%乙醇，组织捣碎机，水浴蒸干，残渣加水溶解→2、制版：1.8g硅胶G，研磨3min，干燥，110C烘箱活化30min→3、点样：→4、展层→5、显色→6、鉴定。
三、实验结果

四、讨论及分析
由样点颜色和Rf值与标准样点对比可知，2号点为Met，6号点为Pro，7号点为His，1—6号点，对应氨基酸为酸性或中性氨基酸，而7、8号对应氨基酸为碱性氨基酸。
薄板上样品中5号显色斑点为紫红色，但距离6号点较近，未能完全分离，推断有以下几点原因：点样时扩散直径过大，导致两斑点扩散区域重叠难以辨认；薄层担体粒度本身的限制，试验中展层时间不长即达到了预计的溶剂前沿（居上边缘约1cm），即展层速度过快，原因可能是制板时硅胶G研磨过粗，据范迪姆特方程：H=A+B/U+Cu,其中A、C均与粒度成正比，即提高填充料的均匀性和减少粒度才能在定长的条件下提高有效搭伴数，增强分离效果；研磨时用力适当，方法合适，适当增加研磨时间才能是硅胶G颗粒又匀又细，达达到较好分离效果。同时，也要注意不可研磨过细，否则易拖尾。