从中药中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法以及筛选得到的SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101921823A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CNCN101921823101921823A(43)申请公布日2010.12.22(21)申请号201010170409.X(22)申请日2010.05.05(71)申请人中国科学院生物物理研究所地址100101北京市朝阳区大屯路15号申请人清华大学南开大学(72)发明人饶子和马明娄智勇李雪梅(74)专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人李红团(51)Int.Cl.C12Q1/37(2006.01)A61K31/201(2006.01)A61K31/202(2006.01)A61P31/14(2006.01)权利要求书3页说明书11页序列表2页附图3页(54)发明名称从中药中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法以及筛选得到的SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂(57)摘要本发明提供了一种从中药中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法以及由此方法筛选出的抑制剂。筛选方法包括如下：A.测定来自单味中药的多种提取物的SARS冠状病毒主蛋白酶体外抑制活性；B.选择具有最好的体外抑制活性的一种提取物；和C.对步骤B所选择的提取物进行至少一轮的分离和选择。本发明筛选出的化合物对SARS冠状病毒主蛋白酶具有体外抑制活性，是极佳的可能上市的药物或潜在的药物前体。CN109283ACN101921823ACCNN110192182301921824A权利要求书1/3页1.一种筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法，包括如下步骤：A.测定来自单味中药的多种提取物的SARS冠状病毒主蛋白酶体外抑制活性；B.选择具有最好的体外抑制活性的一种提取物；和C.对步骤B所选择的提取物进行至少一轮的分离和选择，对每轮分离所得到的各种组分测定SARS冠状病毒主蛋白酶体外抑制活性，选择具有最好的体外抑制活性的一种组分进入下一轮的分离和选择，直至所述分离和选择得到的具有最好的体外抑制活性的组分是一种化合物，将该化合物作为SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤A包括如下步骤：(1).向缓冲溶液中加入SARS冠状病毒主蛋白酶；(2).添加底物和待测物质到缓冲溶液中；和(3).测定待测物质的SARS冠状病毒主蛋白酶体外抑制活性。3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤C中所述的分离选自如下的一种或多种方法：超临界萃取、有机溶剂萃取、色谱分离、电泳分离和膜分离。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述提取物是有机溶剂提取物。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂选自芳香烃类溶剂、脂肪烃类溶剂、脂环烃类溶剂、卤化烃类溶剂、醇类溶剂、醚类溶剂、酯类溶剂、酮类溶剂、二醇衍生物类溶剂和其他有机溶剂。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂选自醇类溶剂和酯类溶剂。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述单味中药为巴豆(fructusofCrotontigliumL.)。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述的多种提取物为巴豆95％乙醇总提取物、巴豆乙酸乙酯提取物和巴豆水相大孔树脂95％乙醇提取物。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述巴豆95％乙醇总提取物、巴豆乙酸乙酯提取物和巴豆水相大孔树脂95％乙醇提取物的提取方法包括如下步骤：(a).将巴豆用95％乙醇溶液回流提取，合并提取液，浓缩得浸膏，即为巴豆95％乙醇总提取物；(b).称取一定量的步骤(a)中所得的浸膏，用双蒸水悬浮，用乙酸乙酯萃取多次，分离乙酸乙酯相和水相；合并水相，备用；合并每次乙酸乙酯萃取物，蒸除其中的乙酸乙酯，得到浓膏状乙酸乙酯相样品，即为巴豆乙酸乙酯提取物；和(c).蒸除步骤(b)中萃取后的水相部分的水中溶解的少量乙酸乙酯，用大孔树脂柱层析分离，依次用水和95％乙醇溶液为流动相分别洗脱多次；弃去水洗部分，合并95％乙醇溶液洗脱部分，蒸除其中的溶剂，得干膏状样品，即为巴豆水相大孔树脂95％乙醇提取物。10.根据权利要求9的方法，其中所述底物为荧光标记底物。11.根据权利要求10的方法，其中所述荧光标记底物为MCA-AVLQSGFRL(DNP)L-NH2。12.根据权利要求1-11任一项的方法筛选获得的SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂在制备用于治疗和/或预防SARS冠状病毒感染的药物中的应用。13.根据权利要求12的应用，其中所述SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂为符合如下不饱和脂肪酸类结构通式的化合物：2CCNN110192182301921824A权利要求书2/3页其中，各个R同时或独立地选自：H、-OH、-ONa、-OK、-OSO3H、-OPO3H2、-OAc、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-OCH2CH2CH2