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基因選殖的策略M-Marker:DNA/HindIII 1-StreptomycesPMS502chromosome 2-1/BamHI(mgDNA/0.18unit) 3-1/BamHI(mgDNA/0.06unit) 4-1/BamHI(mgDNA/0.02unit) 5-1/BamHI(mgDNA/0.007unit) ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGAGCTCGGTACCLigation選殖基因的定序DeterminingDNAsequences 1975FrederickSanger–dideoxynucleosidetriphosphates(ddNTPs) 定序完成後的工作設計PrimersPCR基因產物前的分析工作 解讀限制酶圖譜 Primer序列加上限制酶切位 選擇哪種限制酶切位 Multi-cloningsite有的切位 轉錄或轉譯起始位置的考量(與載體有關) primer設計時要注意序列inframe 實做練習 ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGAGCTCGGTACCCGGAGCCGGGGAGCACATTGGCGGCACCGTGAGAGCGCTCTCAAAGGTCCCGCGTCCCCC660 GCTCCCCGCTCCCGAGAGGCCACCCATGAGTGATTCCTCCGGCACCCCCAGACCCCGTTC720 MSDSSGTPRPRS CCACTCCCGCCCCCGCTCCCGCTCCGTGCGCCGCGCCCTCATGGCGGCCGTCGCGACGTT780 HSRPRSRSVRRALMAAVATF CGGCCTCGCCGCGGCCGTCGCCACCGCGGCCACCGGCCCCGCGGACGCCTCCGCCCCGGC840 GLAAAVATAATGPADASAPA GCCGCCCTCCGGCTGGTCGCAGGTGTTCCTCGACGACTTCGACGGCGCGGCCGGAAGCAG900 PPSGWSQVFLDDFDGAAGSS CGTCAACACCGCCAACTGGCAGTTCGACACCGGCACTTCGTACCCCGGCGGGGCAGGCAA960 VNTANWQFDTGTSYPGGAGN CTGGGGCACTGGCGAGGTCGAGTCGATGACGTCGAGCACCAGCAATGTCTCCCTCGACGG1020 WGTGEVESMTSSTSNVSLDG CAACGGCGATCTGCTCATCACCCCGCGCCGCGACGCGTCCGGCAACTGGACCTCCGGCCG1080 NGDLLITPRRDASGNWTSGR GATCGAGACCACCCGCACCGACTTCCAGCCCCCGGCCGGCGGCAAGCTGCGCGTCGAGGC1140 IETTRTDFQPPAGGKLRVEA GCGCCTGCAGATGCCGAACGTGACCGGGGACGCGGCCGCCGGGTACTGGCCCGCGTTCTG1200 RLQMPNVTGDAAAGYWPAFW GATGCTGGGCGCGCCCTTCCGCGGCAACTACCAGAACTGGCCCGGCGTCGGCGAGCTGGA1260 MLGAPFRGNYQNWPGVGELD CATCATGGAGAACGTCCAGGGCCTGAACAAGACCTGGGCCACCATGCACTGCGGGACCAG1320 IMENVQGLNKTWATMHCGTS CCCCGGCGGGCCCTGCAACGAGACCAGCGGCATCGGCAATTTGACCGCCTGCCCGAACAC1380 PGGPCNETSGIGNLTACPNT CACCTGCCATTCGGGCTTGCACACCTACACCATGGAGTGGGACCGCTCGGTCAGCCCCGA1440 TCHSGLHTYTMEWDRSVSPE GGCGATCCGCTTCTCCGTCGACGGCGTCACCTACCAGACGGTCACGGCGAATCATATGGA1500 AIRFSVDGVTYQTVTANHMD CGCGGTCACCTGGACCAACGCCACGAACCACGGTTTCTTCGTTATCCTGAACGTGGCGAT1560 AVTWTNATNHGFFVILNVAM GGGCGGCGGCTTCCCGGGTGCCTTCGGCGGCGGCCCGACCGGCGCCACCGAGCCCGGCCA1620 GGGFPGAFGGGPTGATEPGH CCCCATGGTCGTCGACTACGTCCAGGTGCTCCAGTCCTCGGGCGGCGGGGGCGGCGGG