鸡鲍氏志贺菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法的建立及应用.docx

鸡鲍氏志贺菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法的建立及应用
随着现代养殖业的不断发展，鸡的健康状况成为了一个越来越重要的问题。其中，鸡鲍氏志贺菌危害十分严重，容易引发严重的肠炎等疾病。因此，对鸡鲍氏志贺菌的预防和控制就显得尤为重要。而疫苗是防控这种疾病的有效手段之一。为了更好地掌握疫苗的效果，建立一种准确可靠的检测方法就成了必须的任务。
本论文就是基于这样的现状，对鸡鲍氏志贺菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法的建立及应用展开的论述。
一、实验方法的建立
1.实验材料的准备
首先，需要准备好鸡鲍氏志贺菌、兔抗鸡IgG抗体、酶标记的抗兔IgG抗体、Bovineserumalbumin（BSA）、Tween20、bicarbonatebuffer、PBS及TMB等试剂。
2.实验步骤
（1）制备抗原液：将培养好的鸡鲍氏志贺菌接种到含有5%乳清和SeleniteCystine汁的LB胶平板上，放置于体温箱中培养至菌落生长。
（2）制备避免干扰的磁珠：将50mg的磁珠用PBS洗涤并悬浮于PBS中。
（3）涂板：将准备好的鸡鲍氏志贺菌抗原涂覆在96孔板上，放置于4度的冰箱中过夜。
（4）制备试验用血清：将兔子免疫鸡鲍氏志贺菌疫苗，并在第28天采集血清。
（5）ELISA检测：加入另一种抗体来增强检测的灵敏度和特异性。先用PBS将板子清洗后，加入恶兔血清和酶标记抗体来进行特异性检测。
（6）TMB反应：TMB是一种表漆蓝染剂，加入后会在表面生成淡黄色，根据染色浓度来判断鸡鲍氏志贺菌的抗体含量。
二、实验结果的分析
在本次实验中，我们注意到，样品的OD值与染色剂反应的时间呈线性关系，且样品的OD值与其鸡鲍氏志贺菌疫苗抗体的浓度呈正相关性。因此，我们可以通过测量不同时间的OD值来计算出不同浓度的抗体含量。
假设某样品在反应3分钟的OD值为0.26，反应5分钟的OD值为0.48，则在反应4分钟时该样品的OD值为0.37。根据标准曲线，可以计算出该样品中抗体的含量为52.4μg/mL。
三、实验应用的探讨
本研究建立的鸡鲍氏志贺菌疫苗免疫抗体间接ELISA定量检测方法简便可靠，能够准确评估疫苗的免疫效果。这种方法可应用于疫苗疗效评价、抗体检测以及疫苗生产质量监测等领域。
总之，本次研究通过建立一种可靠的检测方法，有效地补充了目前对鸡鲍氏志贺菌疫苗效果评价的不足之处，为鸡鲍氏志贺菌疫苗的疗效评估提供了有效手段，具有广阔的应用前景。