猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用.docx

猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
摘要：
猪瘟是一种高传染、致命率极高的疾病，对于猪业来说具有非常重要的意义。现代疫苗在预防和控制猪瘟病毒的传播方面起着关键作用。本研究的目的是建立一种猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法，并进行初步应用。
材料与方法：
收集猪瘟病毒株克隆，构建荧光素酶基因标记的pCAGGS-MPH-NL病毒质粒，通过转染将病毒与荧光素酶基因表达质粒共同感染到BHK-21细胞中。将细胞经过真核表达荧光素酶检测，以获得标记完好且显微观察到的BHK-21细胞。提取并轧制标记后的弱毒疫苗株，用实时荧光RT-PCR方法测定不同批次弱毒疫苗株中的病毒数量。检测病毒数量后，将病毒进行兔化，兔血中的抗体对病毒反应分析病毒稳定性并监控免疫反应。同时，对临床样本进行病毒定量，以检测在不同条件下病毒感染的程度。
结果：
在初步的实验中，我们成功构建了荧光素酶基因标记的pCAGGS-MPH-NL病毒质粒，检测BHK-21细胞的标记功能。我们还成功建立了猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可对病毒数量进行准确定量，并可用于监测病毒稳定性。同时，该方法能够准确检测临床样本中的病毒感染程度。
结论：
我们成功地建立了猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT-PCR检测方法，并进行了初步应用。该方法具有高灵敏度、高特异性的优点，可用于病毒检测和免疫反应的监测。这项研究对于猪瘟病毒的预防和控制有重要的意义，同时也为类似病毒检测和防治提供了新的思路。需要进一步的实验和临床验证以推广其应用。