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工业微生物5.微生物的菌种选育理想发酵工业用菌要求5.1从自然界中获得新菌种纯种分离5.2基因突变和微生物菌种选育(2)细菌培养试验(3)S型菌的无细胞抽提液试验Avery在四十年代以更精密的实验设计重复了以上实验(1)从活的S菌中抽提各种细胞成分(DNA,蛋白质,荚膜多糖等) (2)对各组分进行转化试验只有DNA被酶降解破坏的抽提物无转化活性(二)噬菌体感染实验 在DNA中存在着包括合成蛋白质外壳在内的整套遗传信息。(三)植物病毒的重建实验烟草花叶病毒的核酸亚病毒的一种:具有传染性的蛋白质致病因子,迄今为止尚为发现该蛋白内含有核酸。思考三、原核微生物的质粒1.定义和特点cccDNA另一类质粒的复制与核染色体的复制不同步, 在这类细胞中,一般含10~15个或更多质粒。通常以共价闭合环状(covalentlyclosedcircle,简称CCC)的超螺旋双链DNA分子存在于细胞中;提取所有胞内DNA后电镜观察;质粒的主要功能质粒所编码 的功能和赋 予宿主的表 型效应(1)F质粒(Fplasmid)携带F质粒的菌株称为F+菌株(相当于雄性), 无F质粒的菌株称为F-菌株(相当于雌性)。(2)R质粒(Rplasmid)含调节DNA复制和拷贝数的基因以及转移基因,相对分子量约11×107,具有转移功能;由RTF和r决定子结合而形成R质粒的过程:R100质粒(89kb)可使宿主对下列药物及重金属具有抗性: 汞(mercuricion,mer) 四环素(tetracycline,tet) 链霉素(Streptomycin,Str)、 磺胺(Sulfonamide,Su)、 氯霉素(Chlorampenicol,Cm) 夫西地酸(fusidicacid,fus) 并且负责这些抗性的基因是成簇地存在于抗性质粒上。(3)Col质粒(colicinplasmid,colplasmid)细菌素结构基因、 涉及细菌素运输及发挥作用(processing)的蛋白质的基因、 赋予宿主对该细菌素具有“免疫力”的相关产物的基因细菌素一般根据产生菌的种类进行命名:(4)Ti质粒(tumorinducingplasmid)Agrobacteriumtumefaciens(根癌土壤杆菌或根癌农杆菌)释放出的Ti质粒上的T-DNA片断与植物细胞的核基因组整合,合成冠瘿碱类(opines),破坏控制细胞分裂的激素调节系统,使之变成癌细胞。(5)Ri质粒(rootinducingplasmid)(6)mega质粒(megaplasmid)(7)降解质粒降解质粒以其所分解的底物命名, 例如, CAM(樟脑)质粒, OCT(辛烷)质粒, XYL(二甲苯)质粒, SAL(水杨酸)质粒, MDL(扁桃酸)质粒, NAP(萘)质粒, TOL(甲苯)质粒等“超级菌” 通过遗传工程手段构建具有数种降解质粒的菌株,具有广谱降解能力的工程菌。