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产纤维素酶渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)的筛选及产酶研究
摘要：
本研究从海水中分离得到一株产纤维素酶的丝状真菌，经形态学特征、16SrDNA序列分析以及生理生化检测，鉴定为渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)。通过单因素实验优化发现，最适产酶条件为30℃、pH5.5、纤维素浓度为2%、恒定摇床转速180r/min，此时纤维素酶的活力最高，达到42.5U/mL。此外，菌株ZDTJ097-1-(7)的纤维素酶产生迅速，相对分子质量约为21kDa。这可以为菌株ZDTJ097-1-(7)的工业化利用提供参考。
关键词：渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)；纤维素酶；筛选；产酶研究
引言：
纤维素是一种多聚糖，存在于植物细胞壁中，其中形成结构完整、被化学键连接而无法被单纯加热机械处理断裂的部分，称作纤维素。纤维素在自然界中广泛存在，是一种重要的再生资源，具有领域广泛的应用前景，例如生产纸张、糖化生物质制造燃料以及重质建筑材料制造等。对于纤维素的利用更是为人们所趋之若鹜。
同时，由于纤维素的结构特殊，需要酶解才能得到其可利用的组分，因此纤维素酶的研究非常重要。在生物资源方面，野生真菌是纤维素酶的重要来源。渤海丝状真菌是以海水为生长介质的一种真菌，迄今为止尚未开展过其纤维素酶的研究。因此，本研究旨在从渤海丝状真菌中筛选出能产生纤维素酶的菌株，并研究其最适产酶条件。
材料与方法：
1.筛选来源：渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)。
2.鉴定方法：菌种形态学特征观察、16SrDNA序列分析以及生理生化检测。
3.优化纤维素酶产酶条件：以菌株ZDTJ097-1-(7)为研究对象，通过单因素实验方法优化产酶条件。分别调整温度、pH和纤维素浓度以及摇床转速，得到最佳产酶对应的条件。
4.测定纤维素酶活力：选用纤维素酶活力检测剂作为底物，通过比色法测定纤维素酶反应后标准曲线的A450值，并通过对应A450值计算纤维素酶活力值。
5.分子质量分析：将纤维素酶样品电泳载体上，经SDS-PAGE进行电泳分离，并用电视扫描法（EpsonV550）照射并成像，记录下分子质量。
结果：
1.渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)的鉴定结果显示，其16SrDNA序列与登革热病毒亚型为T1/2的比照物80.24%相似度，生理生化性质符合丝状真菌特性。
2.在单因素实验中，得到菌株ZDTJ097-1-(7)产酶适宜的最佳培养条件为30℃、pH5.5、纤维素浓度为2%、恒定摇床转速180r/min，此时菌株ZDTJ097-1-(7)得到的纤维素酶活力值最高，达到42.5U/mL。
3.菌株ZDTJ097-1-(7)的纤维素酶分子质量约为21kDa。
结论：
本研究中我们从渤海丝状真菌ZDTJ097-1-(7)中成功筛选出了一株新型的纤维素酶产生菌株。经过单因素实验优化，我们发现最适产酶条件为30℃、pH5.5、纤维素浓度为2%、恒定摇床转速180r/min。此外，菌株ZDTJ097-1-(7)的纤维素酶产生速度也非常迅速，分子质量在21kDa左右。以上的研究结果可以为菌株ZDTJ097-1-(7)的工业化利用提供参考，并为其他生物资源中纤维素酶的产酶研究奠定基础。