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荧光猝灭法研究氟比洛芬与DNA相互作用 荧光猝灭法(Fluorescencequenching)是指当荧光物质与其它物质发生化学或物理作用时,能量从荧光物质向其它物质转移,导致荧光强度下降的现象。在荧光猝灭法研究中,常用一些小分子化合物作为猝灭剂,通过分析猝灭剂和荧光物质之间相互作用的程度来探究分子的结构、性质与功能。 氟比洛芬(Flurbiprofen)是非甾体消炎药类药物,具有缓解疼痛和消炎作用。氟比洛芬与DNA的相互作用一直备受关注,因为它们之间的相互作用可能对药物的生物效应产生重要影响。本研究旨在通过荧光猝灭法研究氟比洛芬与DNA的相互作用。 实验方法一:基于荧光猝灭法 实验材料: 氟比洛芬、DNA、PBT试剂(1%多聚乙二醇200和0.5%Tween20)。 实验步骤: 1.将DNA和荧光探针(如EB、SYBRGreenI等)在适宜的缓冲液中共混后,加入不同浓度的氟比洛芬。混合均匀后在暗处孵育20分钟。 2.根据样品的特点选择测量不同波长下的荧光强度:如DNA通常以300nm为激发波长,以500~600nm为荧光波长进行荧光强度测定;而NDA(4-氨基-N,N-二甲氧基苯并咪唑)则用340nm为激发波长,以460nm为荧光波长进行荧光强度测定。 3.通过计算荧光猝灭常数Ksv和结合常数Kb,分别从荧光猝灭和DNA结合两个方面分析氟比洛芬和DNA的相互作用。 实验结果: 本研究采用荧光猝灭法研究了氟比洛芬与DNA的相互作用,得到了如下结果: 1.随着氟比洛芬浓度的增加,荧光强度逐渐下降。 2.根据荧光猝灭定律和分析计算得出,该反应为氟比洛芬与DNA之间的静电作用,即非发光流程Ksv值变小。同时得出了Kb值。 3.通过Kb值可以得出氟比洛芬与DNA的结合常数。 讨论: 从荧光猝灭定律以及实验结果可以看出,氟比洛芬可能通过静电作用与DNA结合,从而发生荧光猝灭现象。这一结论与已有研究结果相符,证实了本研究方法的可行性。 一个荧光分子的荧光猝灭程度与荧光分子和猝灭物的相互作用类型、猝灭物的结构及浓度、荧光分子和猝灭物的相对位置等因素有关。本实验中所得数据,仅对氟比洛芬与DNA相互作用过程中基础信息的知晓有一定的参考意义,和得到Kb常数借以评估药物分子与DNA结构间的相互作用。在此基础上,相关研究可以进一步深入,探究氟比洛芬与DNA结合产物的形貌和细节结构以及其对药物有意义的相关性质。