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新型荧光衍生试剂用于脂肪胺的反相高效液相色谱-荧光检测分析
一、引言
脂肪胺一般指烷基胺的一类化合物，是一种重要的有机化学品。它们广泛地存在于天然和合成材料中，通常用于生产表面活性剂、除蜡剂、塑料助剂等。脂肪胺在许多应用领域包括化学、生物学和医学等方面都有着重要的作用。
由于在这些领域中的许多应用涉及到定量测量脂肪胺的含量，因此开发一种高效、精密、灵敏的检测方法就尤为重要。近年来，各种分析方法都被开发用于脂肪胺的测定，如红外光谱法、质谱法、紫外光谱法和荧光光谱法。然而，相比之下荧光光谱法具有检测极限低、操作简单、重现性好、灵敏度高等优点，因此被广泛地应用于脂肪胺的测定。
在荧光检测中，荧光试剂是关键因素之一。采用荧光试剂可以大大提高荧光检测的灵敏性。由于脂肪胺缺乏紫外吸收特征，因此需要利用荧光检测方法。与传统的荧光试剂相比，新型荧光试剂具有灵敏、稳定、选择性好等优点，被广泛地应用于脂肪胺的检测。
本论文旨在综述利用新型荧光试剂的反相高效液相色谱-荧光检测分析方法，以期为脂肪胺的检测方法学研究提供新的思路和方法。
二、新型荧光衍生试剂
新型荧光衍生试剂可以被分为两类，即脂肪胺-异硫氰酸苄酯类和脂肪胺酰氯类。这些荧光试剂具有良好的选择性和灵敏性，可以用于脂肪胺的检测和定量。
1.脂肪胺-异硫氰酸苄酯类
脂肪胺-异硫氰酸苄酯衍生试剂是一种具有羧基的试剂。当脂肪胺与这种试剂反应时，会形成荧光衍生物。荧光强度较高，检测灵敏性好。该方法适用于对C4-C16的直链和支链脂肪胺进行定量测定。
2.脂肪胺酰氯类
脂肪胺酰氯衍生试剂也是一类常用的荧光试剂。该试剂具有较高的稳定性和反应速率，能很快地产生荧光化合物，检测灵敏度和选择性均优秀。该类试剂可以对C1-C30的脂肪胺进行精密的定量测定。
三、反相高效液相色谱-荧光检测法
反相高效液相色谱-荧光检测法是一种广泛应用于脂肪胺检测的方法。它基于反相色谱技术，将样品分离并单独检测，同时利用荧光试剂增强荧光信号，提高检测灵敏度。该方法具有分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快等优势。
该方法的主要实现步骤包括样品前处理、色谱分离、荧光检测等步骤。在样品前处理的步骤中，可以选择沉淀法、溶剂提取法、蒸馏法等方法，获得高纯度的样品。在色谱分离阶段，采用反相色谱技术，在固定相中通过样品分离，得到特定的目标成分，并增加荧光试剂以提高荧光信号。荧光检测则使用特定的光源和检测器来测量样品产生的荧光信号，以达到目的。
四、实验方法
1.试剂和仪器
异硫氰酸苄酯（BSC）、己基三甲氧基硅烷（HMDS）、己基硅氧烷（HMS）、对氨基丙基三甲氧基硅烷（APTES）、异硫氰酸苄酯级联靛（BCID）、异硫氰酸苄酯联苯胺（BCPA）、己基磺酸钠和乙腈是分析试剂，均为优级。
色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm）。
色谱仪：WatersHPLC-FLD。
2.实验步骤
（1）样品制备
取1mL的样品溶液，加入BSC试剂，使其浓度为50mM/L，然后加入己基三甲氧基硅烷（HMDS），浓度为200mM/L。样品与试剂、溶剂混合，在50°C温度下加热反应15min。冷却后，加入少量氨水中和溶液中未反应的BSC和HMDS。
（2）色谱分离
将样品经过前处理后注入反相高效液相色谱系统，流动相为甲醇/水调整pH至2.0（97/3，v/v），流速为1.0mL/min。
（3）荧光检测
荧光检测波长为Ex346nm，Em420nm。同时测定标样和待测样的荧光强度，并计算出其含量。
五、实验结果
本文采用上述方法对脂肪胺进行了定量测定。样品提取采用了溶剂萃取法，制备样品与试剂混合后反应，然后通过反相高效液相色谱-荧光检测法测定了脂肪胺的含量。
在反相高效液相色谱-荧光检测法的实验结果中，通过BSC和HMDS共同作用，生成了荧光物质，荧光信号明显提高。在不同的反应条件下，荧光强度和检测灵敏性均较好。在色谱分离过程中，提高了样品的检测灵敏度，并克服了在检测过程中背景信号的干扰。同时，该方法还可以对C1-C30的脂肪胺进行定量测定，并可以在短时间内快速分析多个样品。
六、结论
本文介绍了一种利用新型荧光试剂的反相高效液相色谱-荧光检测分析方法，用于对脂肪胺的定量分析。通过反相高效液相色谱技术分离样品，并增加新型荧光试剂以达到提高荧光信号、增强检测灵敏度的作用。该方法具有测试精度高、稳定性强、操作简单、操作速度快等特点，为脂肪胺的检测提供了一种新的方法。