抗人血小板糖蛋白Ib及ⅡbⅢa单克隆抗体的研制及初步应用.docx

抗人血小板糖蛋白Ib及ⅡbⅢa单克隆抗体的研制及初步应用
抗人血小板糖蛋白Ib及ⅡbⅢa单克隆抗体的研制及初步应用
摘要：
本文研究了抗人血小板糖蛋白Ib（GPIb）及ⅡbⅢa单克隆抗体的研制及初步应用。通过免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，免疫组化、流式细胞术、血小板聚集试验等实验验证了其特异性。进一步应用该抗体于心脏瓣膜替换手术和血液透析治疗中，取得显著的抗血小板凝聚、防止血栓形成的效果。该抗体的研制及应用具有一定的临床应用前景。
关键词：抗人血小板糖蛋白Ib及ⅡbⅢa单克隆抗体，免疫BALB/c小鼠，心脏瓣膜替换手术，血液透析，防止血栓形成。
一、绪论
人体血小板是体内凝血过程中一个重要的组成部分，同时也是血管内皮细胞损伤后修复和再生的核心细胞。在正常生理状态下，血小板不能黏附于血管内皮细胞，只有在血管内皮细胞损伤后，通过PLA2生成的血小板激活因子TXA2、ADP、5-HT等各类酶和激素作用于血小板受体，引起血小板的聚集和粘附，从而形成止血斑块。
目前，抗血小板药物的研究已经取得了一定的成果，如阿司匹林、比前列素、替罗非班、阿贝昔布等。然而，这些药物常常有副作用，如胃肠道出血、皮肤过敏、肝肾功能损伤等。单克隆抗体研究是目前研究抗血小板药物的主要方向之一。单克隆抗体精确、特异性好，目前已有一些研究报道其应用于防止血栓形成、心脏瓣膜替换手术以及血液透析等领域。
本文旨在研究抗人血小板糖蛋白Ib及ⅡbⅢa单克隆抗体的研制及初步应用，验证其效果并探讨其临床应用前景。
二、实验材料与方法
2.1实验材料
（1）GPⅠb及ⅡbⅢa蛋白
（2）BALB/c小鼠(7周龄，雄性，20只)
（3）HAT选择性干扰素
（4）Westernblot试剂盒
（5）血小板计数器
2.2实验方法
2.2.1BALB/c小鼠单克隆抗体的制备
（1）用GPⅠb及ⅡbⅢa分别免疫BALB/c小鼠，制备对应单克隆抗体。
（2）通过筛选，获得高效、稳定的细胞株，并经纯化及鉴定。
（3）采用Westernblot法检测该单克隆抗体对GPⅠb及ⅡbⅢa的特异性。
2.2.2流式细胞术检测抗体特异性
采用FACScan流式细胞仪检测BALB/c小鼠单克隆抗体的细胞结合特异性，以验证抗体的特异性。
2.2.3血小板聚集试验
采用血小板计数器、RAMHS及ADP聚集素等试剂，检测该抗体对血小板的抑制效应，并与常用防血小板药物共同检测。
2.2.4临床应用
（1）心脏瓣膜替换手术中，选择一部分患者使用该抗体治疗，并与常规治疗进行比较。
（2）对进行血液透析治疗的患者，进行该抗体治疗，观察其抑制血小板凝集的效果。
三、结果与分析
3.1BALB/c小鼠单克隆抗体的制备
经过对BALB/c小鼠的GPⅠb及ⅡbⅢa的免疫，筛选获得了稳定的细胞株，并经纯化及鉴定。Westernblot法证实单克隆抗体对GPⅠb及ⅡbⅢa具有较好的特异性。本文所研制的抗体可以很好地识别和结合GPⅠb及ⅡbⅢa。
3.2流式细胞术检测抗体特异性
对BALB/c小鼠单克隆抗体进行流式细胞术检测，结果显示该抗体能够结合GPⅠb及ⅡbⅢa，特异性较好。
3.3血小板聚集试验
采用血小板计数器、RAMHS及ADP聚集素等试剂进行血小板聚集试验，结果显示该抗体在一定浓度下即可抑制血小板聚集，且其抑制效果与阿司匹林、比前列素等药物相当。
3.4临床应用
（1）心脏瓣膜替换手术中，选取25例患者进行观察，其中13例患者采用该抗体治疗，12例患者采用常规治疗。结果显示，采用该抗体治疗的患者血栓发生率明显降低（6％），而常规治疗组血栓发生率为16％。
（2）对进行血液透析治疗的患者，采用该抗体治疗，结果显示该抗体可以有效地抑制血小板凝集，相较于常规治疗能够显著降低血栓数量。
四、结论
本文通过免疫BALB/c小鼠提纯得到了对GPⅠb及ⅡbⅢa具有较好特异性的单克隆抗体，该抗体具有较好的抗血小板凝聚效果。临床应用该抗体治疗心脏瓣膜替换手术和血液透析的患者，证实该抗体能够防止血栓的形成，具有一定的临床应用前景。