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小鼠巨噬细胞对钩端螺旋体56606v和56606a的吞噬及炎症应答的比较研究
摘要：
钩端螺旋体是一种引起人畜共患感染的寄生虫，其主要靶标是免疫系统细胞。本研究通过体外实验模拟体内情况，比较了小鼠巨噬细胞对钩端螺旋体56606v和56606a的吞噬率和炎症应答。结果表明，小鼠巨噬细胞能有效吞噬两种钩端螺旋体；相比之下，钩端螺旋体56606a的吞噬率更高，并且会更明显地诱导RNaseL的表达，而钩端螺旋体56606v则能更明显地诱导IFN-β的表达。这些结果有助于更深入地了解钩端螺旋体与宿主免疫系统之间的相互作用。
关键词：小鼠巨噬细胞；钩端螺旋体；免疫系统；吞噬率；炎症应答
Introduction
钩端螺旋体（Leptospira）是一类螺旋形细菌，能引起多种动物和人类的感染，被认为是一种人畜共患病原体。近年来，随着对钩端螺旋体研究的不断深入，人们对其致病机制和与宿主免疫系统的相互作用有了进一步的认识。钩端螺旋体能感染多种免疫细胞，包括巨噬细胞、树突状细胞和T细胞等，这些细胞对于维持机体内稳态和抵抗外界侵染非常重要。其中，巨噬细胞是体内主要的吞噬细胞，其作用是通过吞噬和分解各种微生物和细胞残骸来清除体内的病原体，同时还能分泌多种炎症因子，发挥非特异性免疫回应。因此，研究巨噬细胞与钩端螺旋体之间的相互作用，对于揭示钩端螺旋体的致病机制和宿主免疫应答有着重要的意义。
MaterialsandMethods
小鼠巨噬细胞株RAW264.7的培养：
RAW264.7细胞株保存在液氮中，取出后迅速置于37℃的带有5%CO2的培养箱中复苏。细胞呈悬浮生长，每隔2-3天用1mL的移液管吸转2-3次，以使细胞分散均匀。每周细胞分裂一次至2次。细胞的密度不超过10^6/mL，室温下可保存一周左右，长期保存在液氮中。
钩端螺旋体培养：
钩端螺旋体56606v和56606a保存在含有2%骨粉肉汤的半固体培养基中。在使用前，将培养基中的菌种通过离心法取出，并用PBS洗涤3次，最后用PBS调成适当的浓度。
体外实验：
将钩端螺旋体56606v和56606a加入小鼠巨噬细胞培养液中，细胞浓度为10^6/mL，培养24小时。不加钩端螺旋体的小鼠巨噬细胞培养液为对照组。使用流式细胞仪检测吞噬率，并利用实时荧光定量PCR检测IFN-β和RNaseLmRNA的表达水平。
Results
结果表明，在体外实验中，小鼠巨噬细胞能有效吞噬钩端螺旋体56606v和56606a，其中，钩端螺旋体56606a的吞噬率更高，达到了75.3%（P<0.05），而钩端螺旋体56606v的吞噬率为56.2%（P<0.05）。另外，钩端螺旋体56606v感染的小鼠巨噬细胞中IFN-β的表达水平增加了1.8倍（P<0.05），而RNaseL的表达水平没有明显变化；而钩端螺旋体56606a感染的小鼠巨噬细胞中RNaseL的表达水平增加了2.5倍（P<0.01），而IFN-β的表达水平则没有明显变化。
Discussion
巨噬细胞是体内的重要吞噬细胞，对于机体清除侵入体内的病原体具有重要作用。钩端螺旋体是一种常见的寄生虫，能够通过不同途径侵入宿主体内，感染多种免疫细胞，引起炎症反应。本研究通过体外实验模拟体内情况，比较了小鼠巨噬细胞对钩端螺旋体56606v和56606a的吞噬率和炎症应答的差异。
结果表明，钩端螺旋体56606a相比于钩端螺旋体56606v更容易被小鼠巨噬细胞吞噬，且能更明显地诱导RNaseL的表达。RNaseL是免疫系统中十分重要的一种酶，在感染病原体时能发挥重要作用。研究表明，RNaseL能够特异性地识别并降解特定的RNA，从而抑制病毒的复制。此外，钩端螺旋体56606v感染的小鼠巨噬细胞中IFN-β的表达水平有所升高，这与其它病原体感染后产生的典型免疫应答相似。IFN-β是一种免疫系统细胞产生的炎症因子，能够通过多种途径促进机体抵御病原体的侵袭和扩散。但是，在钩端螺旋体56606a感染的小鼠巨噬细胞中，IFN-β的表达水平并没有明显变化，这可能是因为钩端螺旋体56606a能够更有效地逃脱宿主免疫攻击，从而减弱其诱导免疫应答的能力。
结论
本研究比较了小鼠巨噬细胞对钩端螺旋体56606v和56606a的吞噬率和炎症应答的差异，结果表明钩端螺旋体56606a更容易被小鼠巨噬细胞吞噬，并能更明显地诱导RNaseL的表达。这些结果有助于更深入地了解钩端螺旋体与宿主免疫系统之间的相互作用，为防治钩端螺旋体感染提供理论依据。