一种植物根边缘细胞无菌培养装置与方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103333801103333801B(45)授权公告日2014.09.10(21)申请号201310272549.1CN101534633A,2007.09.12,全文.CN101384717A,2009.03.11,全文.(22)申请日2013.06.28刘婷婷等.铜离子胁迫下玉米根边缘细胞数(73)专利权人浙江大学量及存活率.《植物生理学报》.2012,第48卷(第地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路7期),全文.38号豆长明等.超积累植物美洲商陆根中锰的累(72)发明人彭程施积炎何俊昱刘婷婷积与解毒.《土壤学报》.2010,第47卷(第1期),宋婕全文.(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公冯英明.不同硼水平豌豆根边缘细胞对铝毒司33200的反应.《中国优秀硕士学位论文全文数据库农代理人杜军业科技辑》.2005,(第8期),全文.(51)Int.Cl.审查员王斌C12M3/00(2006.01)C12N5/04(2006.01)A61L2/10(2006.01)(56)对比文件CN87102613A,1988.10.19,全文.CN2692156Y,2005.04.13,说明书、权利要求1及说明书附图1.权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图1页附图1页(54)发明名称一种植物根边缘细胞无菌培养装置与方法(57)摘要本发明公开了一种植物根边缘细胞无菌培养装置与方法。本发明是为了克服水培、土培等培养方式边缘细胞损失量大、实验周期长以及解决现有的植物根边缘细胞培养装置无法保证无菌环境和细胞收集量等不足。其装置包括立方体柜、滑轮轨道、轨道处滑轮、抽屉隔板、抽屉隔板上滑轮、开关门、开关门合页、磁碰、拉手、紫外灭菌灯、万向轮。所述的立方体柜由六面围合而成，内部设置有滑轮轨道、抽屉隔板、紫外灭菌灯等，抽屉隔板上设置有通孔供植物根穿过。其方法，包括下列步骤：1.准备好植物根边缘细胞无菌培养装置；2.植物种子消毒；3.种子萌发后移至植物根边缘细胞无菌培养装置中；4.用加湿器进行喷雾培养，待达到实验要求后进行原位取样。CN103333801BCN1038BCN103333801B权利要求书1/1页1.一种植物根边缘细胞无菌培养装置，其特征在于包括立方体柜、滑轮轨道、轨道处滑轮、抽屉隔板、开关门、开关门合页、磁碰、拉手、紫外灭菌灯、万向轮；所述的立方体柜由六面围合而成，内部中空；其一个侧面设置有开关门，开关门的下沿距离立方体柜下底面5cm，上沿与立方体柜上表面边沿重合；所述的开关门与相邻的左右侧面活动连接，其外壁上设置有拉手；与开关门相邻的一个侧面内壁上设置有磁碰，磁碰与靠近开关门的侧壁内边沿重合，且开关门内壁设置有与该磁碰相对应的铁块；开关门与相邻的另一个侧面通过开关门合页相连接；所述的与开关门相邻的左右侧面内壁上，距下表面三分之二处设置有滑轮轨道，且滑轮轨道靠近开关门的一端设置有轨道处滑轮；抽屉隔板上设置有抽屉隔板上滑轮，并通过抽屉隔板上滑轮与滑轮轨道相连接；紫外灭菌灯设置在立方体柜的内侧面上，该内侧面与开关门对应，且紫外灭菌灯位于立方体柜上表面与抽屉隔板之间；所述的立方体柜的上表面开有多个通孔，用于气体流动，通孔上方设置有直径大于通孔直径、孔径为0.22微米的滤膜，用于滤除空气中微生物；所述的立方体柜的下表面开有底部排水孔，且设置有配套阀门，其四个直角端设置有万向轮，立方体柜中与开关门对应的侧面设置有电源线孔；所述的紫外灭菌灯带有防水罩；所述的抽屉隔板上设置有多个通孔，其上铺有两层浸湿纱布。2.一种利用权利要求1所述的植物根边缘细胞无菌培养装置无菌培养植物根边缘细胞方法，其特征在于包括下列步骤：步骤(1)：挑选颗粒均匀饱满的植物种子，自来水洗净后用10％次氯酸钠溶液浸种10min用于种子表面杀菌，超纯水充分清洗后置于超纯水中浸泡6小时；步骤(2)：将浸泡后的种子转移至盖有湿润纱布的培养皿中，置于黑暗环境下25℃的恒温培养箱中萌发；步骤(3)：准备好所用的植物根边缘细胞无菌培养装置准备包括：植物根边缘细胞无菌培养装置的立方体柜上表面通孔处粘贴孔径为0.22微米的滤膜，在抽屉隔板上放两层经高温灭菌的浸湿纱布，将开关门打开，放入盛有无菌水配置的0.1mM氯化钙溶液的加湿器后关闭开关门，利用紫外灭菌灯进行紫外灭菌；步骤(4)：待种子露白后将其均匀铺置于植物根边缘细胞无菌培养装置中的抽屉隔板纱布上；加湿器喷雾培养48～72h，每隔5min喷雾一次，每次喷雾30s，昼夜温度为26～22℃，避光；培养结束后，打开装置开关门，抽出抽屉隔板对植物根边缘细胞进行原位采样；所述的植物根边缘细胞无菌培养装置中，种子需垂直放置以防止边