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不同来源苦楝种质资源遗传多样性的RAPD分析
引言：
苦楝（MeliaazedarachL.）是苦楝科苦楝属植物，广泛分布于我国、印度、东南亚及南美洲等地，是一种重要的药用植物和观赏植物。苦楝的种质资源遗传多样性是保护该物种、开发利用其遗传可塑性的关键。本文利用RAPD分子标记技术，比较分析了来自不同地区的苦楝种质资源中的遗传多样性。
材料与方法：
1.实验材料
本研究使用了来自我国不同地区的苦楝种质资源样本共计16份，分别为濮阳（PY）、广州（GZ）、南昌（NC）、长沙（CS）、合肥（HF）、江门（JM）、深圳（SZ）、苏州（SZ）、南充（NC）、北京（BJ）、南京（NJ）、沈阳（SY）、成都（CD）、昆明（KM）、烟台（YT）、兰州（LZ）。
2.DNA提取
采用CTAB法从苦楝叶片中提取总DNA，并用乙醇储存。DNA质量和纯度经NanoDrop8000系列生物分光光度计检测满足要求。
3.RAPD-PCR反应
使用随机引物P1-P20对以上16份苦楝DNA进行RAPD-PCR扩增反应。PCR反应体系总量为25μl，包括10×缓冲液2.5μl、MgCl2（25mM）0.5μl、dNTPs（2.5mM）0.5μl、引物（10μM）1.5μl、TaqDNA聚合酶（5U/μl）0.25μl、模板DNA50ng、蒸馏水14.25μl。PCR反应程序:先将反应体系在94℃下变性3min,再用34个循环的程序进行扩增，每个循环包括94℃的变性1min、特定温度的退火1min、72℃下的延伸1min,最后72℃下延伸10min.
4.电泳图谱制备
将RAPD-PCR反应体系的扩增产物通过1％琼脂糖凝胶电泳分离并染色，在蒸馏水中进行漂洗后放到UV镜箱中进行观察，记录图谱。
5.数据分析
采用POPGENE软件分析遗传距离，构建UPGMA分型树。
结果：
1.RAPD扩增产物
在本实验中，选用20条引物进行了反应，其中17条引物扩增产物清晰、具有多态性和可重复性。所有PCR产物的长度大致在300bp-2200bp之间。
2.遗传多样性分析
根据RAPD扩增产物的分型图，16个苦楝样本共检出了109条DNA片段，其中98条是多态性片段，多态百分率为89.91％。来自兰州的苦楝种质资源具有最多的多态性片段，达到92条，多态率达到84.40%；而来自烟台的苦楝种质资源只有24条多态性片段，多态率仅为22.02％。
通过遗传距离矩阵和UPGMA聚类分析，可以将这16个苦楝品种分成4个大类。其中，来自兰州的所有品种全部分在第一大类，来自沈阳的两个品种与来自南充的两个品种共同分布在第二大类中，来自苏州、成都、南京、长沙和北京的品种都分布在第三大类中，来自濮阳、广州、南昌、深圳、江门、昆明和烟台的品种全部分在第四大类。
讨论：
基于RAPD分子标记技术，本研究比较分析了我国不同地区的苦楝种质资源中的遗传多样性。结果表明，苦楝种质资源在遗传多样性上表现出较大的差异性，不同地区之间的差异也很大。另外，苦楝种质资源的多样性主要是来源于内部变异而不是受外界因素影响的结果。由于兰州地区的干旱严重，该地区的苦楝品种所展现的多样性是该物种适应干旱环境的结果；而烟台地区较为湿润，苦楝品种没有充分体现该区域的多样性。
在相同的引物下，不同地区之间的多样性也有很大差异，这反映了不同地区历史上的遗传演化及环境因素的影响。而本研究的结果也为苦楝种质资源的注记、保护和利用提供了重要的基础数据。
结论：
RAPD分子标记技术是有效的遗传多样性分析技术，在苦楝种质资源的分析中得出的结论表明不同地区间苦楝种质的遗传差异比较大。同时也说明苦楝种质资源的多样性主要是来源于内部变异，而不是受外界因素影响的结果。本研究的结果对苦楝物种的基因保护、遗传改良、各地特色苦楝品种的合理推广和利用等具有重要应用价值。