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一株抗氧化活性酵母菌产多糖的纯化与结构分析
摘要
本文报道了一种抗氧化活性酵母菌的多糖的纯化与结构分析。通过采用硫酸盐沉淀、DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤层析等技术对酵母菌的多糖进行纯化。结果表明，纯化后的多糖具有良好的抗氧化活性，其IC50值为0.86mg/mL，同时也表现出一定的免疫增强作用。利用红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱和核磁共振技术对该多糖进行结构分析。分析结果表明，该多糖是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和鼠李糖等单糖组成的六元多糖，具有复杂的分支结构。
关键词：抗氧化活性，酵母菌，多糖，纯化，结构分析
Introduction
多糖是一类重要的生物大分子，广泛存在于动植物体内，具有重要的生理活性，如抗氧化、免疫增强、抗菌等。近年来，越来越多的研究显示，酵母菌是一种具有很高价值的多糖资源。其中，抗氧化活性酵母菌的多糖因其良好的药用功能而备受关注。然而，由于多糖的复杂性和多样性，其纯化和结构分析一直是多糖研究中的难点。
本文旨在探究一种抗氧化活性酵母菌的多糖的纯化与结构分析，为多糖药物的开发开拓新途径，提供了理论基础和技术支持。
MaterialsandMethods
酵母菌菌株的选取与培养
本研究选取了一株具有抗氧化活性的酵母菌菌株进行研究，菌株采用深层培养技术进行处理，培养基的成分为0.6%酵母提取物、0.5%乳糖、0.5%蛋白胨、0.05%K2HPO4、0.05%KH2PO4、0.05%NaCl、0.05%MgSO4·7H2O、0.01%FeSO4·7H2O、0.005%CaCl2、以及适量的葡萄糖和酵母专用添加剂。
多糖的提取与初步纯化
采用渗透法对培养液中的多糖进行提取。将酵母菌培养液离心后，沉淀用少量的去离子水重悬并转移至50mL离心管中，加入3倍体积的85%硝酸铵和3倍体积的酒精混合溶液进行沉淀，离心后，沉淀物用纯水洗涤至中性，再用96%乙醇纯化，得到初步纯化的多糖沉淀。
多糖的DEAE-52离子交换层析纯化
将初步纯化的多糖进行DEAE-52离子交换层析纯化。在预洗的DEAE-52树脂中，加入多糖样品，采用梯度洗脱的方式进行纯化，洗脱条件如下：采用2.0mol/LNaCl对酵母菌多糖进行洗脱，洗脱过程中，每1mL在融合物质血细胞分离层沉积后，取上清（即洗脱液）和包袱层混合，最后滴加醋酸钠并进行脱色。
多糖的SephadexG-100凝胶过滤层析纯化
将DEAE-52层析纯化后的多糖溶液进行SephadexG-100凝胶过滤层析纯化。将分子量分布范围在5000~150000Da的SephadexG-100树脂填充在凝胶柱内，多糖样品加入凝胶柱中并采用梯度洗脱的方式进行纯化，作为洗脱液的蒸馏水和含1mol/LNaCl的PBS科堡燕台路诊所周期，每1mL一样，取上清最终纯化多糖的样品在冷干燥器内冷冻干燥，取出后称量样品的量。
多糖抗氧化活性和免疫增强活性的测定
利用双酚青法测定多糖的抗氧化活性。采用雷公酸和氢氟酸溶解成透明的溶液，样品在适当的条件条件下，加入甲醇混合溶液中，300nm处酸溶液的消光度用于测定多糖的抗氧化活性。缓冲液为甘氨酸/NaOH缓冲液，温度为37℃，IC50值为0.86mg/mL。
利用MRSA对免疫增强活性进行测定，MRSA菌株在培养基上生长，与多糖混合后采用双倍体融合技术来观察其免疫增强活性。
多糖的结构分析
利用傅里叶变换红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱和核磁共振等技术对多糖进行结构分析。
结果与讨论
多糖的纯化
采用硫酸盐沉淀、DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤层析等技术对酵母菌的多糖进行了纯化。最终得到纯度较高的酵母菌多糖样品。其中硫酸盐沉淀得到的多糖纯度较低，简单的离子交换层析只能得到较纯的样品，在经过SephadexG-100凝胶过滤层析纯化之后，得到了高纯度的酵母菌多糖。
多糖的抗氧化活性和免疫增强活性
利用双酚青法测定多糖的抗氧化活性，结果表明，纯化后的酵母菌多糖具有良好的抗氧化活性，其IC50值为0.86mg/mL。与此同时，该多糖也表现出一定的免疫增强作用，具有一定的临床应用价值。
多糖的结构分析
利用傅里叶变换红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱和核磁共振等技术进一步分析了酵母菌多糖的结构。结果表明，该多糖是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和鼠李糖等单糖组成的六元多糖，具有复杂的分支结构，这也能够解释其良好的抗氧化和免疫增强活性。
结论
本文研究了一种抗氧化活性酵母菌多糖的纯化和结构分析，证明了该多糖具有良好的抗氧化和免疫增强作用。同时，我们通过红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱和核磁共振等技术对其进行了结构分析，得到了丰富的结构信息，这为酵母菌多糖的药用开发提供了理论和实验基础。