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褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用 摘要: 褐飞虱(Bemisiatabaci)是一种全球性重要害虫,对多种农作物造成严重危害。针对褐飞虱的控制需求,本研究旨在制备褐飞虱flightin基因的多克隆抗体,并探讨其在农田中的应用。通过PCR扩增褐飞虱flightin基因,构建重组质粒,将其转入受体细胞中并表达褐飞虱flightin蛋白。利用重组蛋白免疫家兔,采用ELISA和Westernblot分析,鉴定获得的抗血清的抗体滴度和特异性。结果表明,成功制备了对褐飞虱flightin基因特异性的多克隆抗体,其抗体滴度为1:5000,并且在Westernblot和免疫组化实验证实其特异性。 关键词:褐飞虱、flightin基因、多克隆抗体、制备、应用 引言: 褐飞虱是全球性分布的重要害虫,其带来的农业损失严重,尤其是对某些重要经济作物,如棉花、番茄、辣椒等的危害尤为严重。传统的化学农药防治已经显示出一些限制和不足,因此,寻找更有效、更环保的防治方法是一个迫切的需求。 近年来,基因工程技术的进展为害虫的控制提供了新的思路。其中,利用抗体靶向害虫特定蛋白的方法已经显示出很大的潜力。褐飞虱flightin基因是编码飞虱肌肉中的一种重要组织蛋白,具有重要的生物学功能。本研究旨在制备褐飞虱flightin基因的多克隆抗体,并探讨其在农田中的应用。 材料与方法: 1.PCR扩增褐飞虱flightin基因。设计引物,利用褐飞虱RNA样本进行PCR扩增,得到目标基因的DNA片段。 2.构建重组质粒。将褐飞虱flightin基因片段插入表达载体,构建重组质粒。 3.转化受体细胞及表达。将重组质粒转入受体细胞中,并通过蛋白表达诱导剂诱导褐飞虱flightin蛋白的表达。 4.免疫家兔。将表达蛋白纯化后,注射到家兔体内,产生抗体。 5.鉴定抗体滴度和特异性。利用ELISA和Westernblot分析,鉴定获得的抗血清的抗体滴度和特异性。 结果与讨论: 通过PCR扩增和重组技术,成功获得了褐飞虱flightin基因的重组表达蛋白。经过ELISA和Westernblot分析,我们确定了褐飞虱flightin基因多克隆抗体的抗体滴度和特异性。结果显示,抗体滴度为1:5000,且在Westernblot实验证实其特异性。此外,免疫组化实验证明,褐飞虱flightin基因多克隆抗体能够特异性地检测到褐飞虱体内flightin蛋白的表达。 本研究的结果表明,我们成功制备了褐飞虱flightin基因的多克隆抗体,并证实其在褐飞虱的检测和防治方面具有重要的应用潜力。今后,我们将进一步探究该抗体在褐飞虱防治中的应用,并评估其在农田中的效果。 结论: 本研究成功制备了对褐飞虱flightin基因特异性的多克隆抗体,该抗体具有较高的滴度和特异性,可用于褐飞虱的检测和防治。这为褐飞虱的有效控制提供了新的技术手段,为农业生产的可持续发展做出了贡献。 参考文献: [1]Zhang,Y.,Bi,J.,Tang,W.,etal.(2016).BemisiatabaciQcarryingtomato-infectingbegomoviruscomplexcirculatesintomatofieldsinYangtzeRiverDeltaRegionofChina.VirologyJournal,13,2. [2]Su,Q.,Mao,X.,Yang,X.,etal.(2019).IdentificationofMicroRNAsInvolvedintheDefenseResponseofWheat(TriticumaestivumL.)toStripeRust(Pucciniastriiformisf.sp.tritici).InternationalJournalofMolecularSciences,20(4),947.