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液相色谱-质谱联用系统在肝硬化不同阶段代谢轮廓研究中的应用
摘要
本文采用液相色谱-质谱联用技术研究肝硬化不同阶段患者的代谢轮廓，分析其代谢物水平的变化，发现肝硬化的不同阶段代谢物组成发生了显著的变化。同时，本研究结果为肝硬化不同阶段的诊断提供了有力的实验依据，也为开展肝硬化代谢治疗提供了有效的指导。
关键词：液相色谱-质谱联用；肝硬化；代谢轮廓；代谢物
引言
肝硬化是严重危害中老年人健康的一种慢性肝脏疾病，其发病率逐年升高。随着临床医学技术的不断进步和各种高通量技术的出现，代谢组学研究越来越受到关注。液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）是目前代谢组学研究中最常用的技术之一，它能够分析并识别复杂样品中的成分，并且能够在高通量下分析样品，具有较高的检测灵敏度和特异性。因此，液相色谱-质谱联用技术在肝硬化代谢轮廓研究中的应用具有重要的意义。
材料与方法
研究对象
本研究采集了60例肝硬化患者，其中包括20例肝功能代偿期患者、20例肝功能失代偿期患者和20例肝功能衰竭期患者。同时，还采集了40例健康无肝脏疾病的人群作为对照组。
样品制备
采用乙腈-水（1:1，v/v）提取代谢物，在−80℃冰箱冷冻24h后，离心后收集上清液，进行LC-MS分析。
LC-MS分析
采用WatersACQUITYUPLC系统（Waters,Milford,MA）进行液相色谱分析，采用Agilent6530Q-TOFMS（AgilentTechnologies,SantaClara,CA）进行质谱检测。使用正离子和负离子扫描进行分析，从m/z50到1000进行扫描。
数据分析
使用MassLynx软件（Waters,Milford,MA）对得到的数据进行处理和分析。使用PCA和PLS-DA等多元统计分析方法对数据进行分析。
结果
代谢物水平变化
本研究发现，随着肝功能的恶化，肝硬化患者的代谢物组成出现了明显的变化。以肝功能失代偿期患者为例，与对照组相比，乙酰化型氨基酸、磷脂和脂肪酸的水平显著升高（P<0.05），而氨基酸、尿酸和甲酸的水平显著降低（P<0.05）。
由PLS-DA分析可以看出，肝硬化不同阶段患者的代谢物组成存在显著差异，同时不同阶段患者之间的代谢物水平也有所不同。以肝功能失代偿期和肝功能衰竭期患者为例，两组患者的代谢物组成相似度只有54%。
诊断依据
通过本研究的结果，我们可以发现不同阶段的肝硬化患者具有明显的代谢物水平差异，因此液相色谱-质谱联用技术可以作为肝硬化不同阶段的一种诊断依据。此外，液相色谱-质谱联用技术也可以用于评估肝移植后的肝功能恢复情况，为肝移植后的治疗提供指导。
结论
本研究采用液相色谱-质谱联用技术研究肝硬化不同阶段患者的代谢轮廓，发现代谢物组成发生了显著的变化。本研究结果可以为肝硬化不同阶段的诊断提供有力的实验依据，也为开展肝硬化代谢治疗提供了有效的指导。