基因功能分析的基本策略.pptx

第十二章基因功能分析的基本策略第一节利用转基因模型研究基因的功能Dicer是由核酸内切酶和解旋酶等组成的酶复合体。
这样打靶载体包含了部分待剔除的基因片段、阳性筛选标志基因、阴性筛选标志基因。
6、建立人类疾病的动物模型，为人类的基因治疗提供依据；
这样打靶载体包含了部分待剔除的基因片段、阳性筛选标志基因、阴性筛选标志基因。
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12、故人江海别，几度隔山川。
任何序列的DNA，当其位于两个loxP位点之间的时候，在Cre重组酶的作用下要么被缺失(两个loxP位点的方向相同)，要么方向发生倒转(两loxP位点的方向相反)，如图所示。
2、双链干涉RNA的合成；
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2、外源基因随机整合可能引起插入突变，破坏宿主基因组功能；
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11、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。
在特定基因剔除时，利用打靶载体上留下的部分待剔除的基因片段作为基因组上相同基因的同源臂，当打靶载体与细胞基因组的同源基因发生同源重组时，打靶载体上的失活基因替代基因组上的基因，同时利用插入在基因同源臂之间的阳性、阴性标志基因进行鉴定。
重组系统来实现的。一、转基因动物11月-2211月-2209:43:3409:43:34November3,2022
胜人者有力，自胜者强。
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它是在基因的转录后水平抑制基因表达的一种研究基因功能的方法。
12、故人江海别，几度隔山川。
16、业余生活要有意义，不要越轨。
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。
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17、做前，能够环视四周；
基因功能是在细胞组成的多层次的复杂生命体中实现的，因此对基因功能的研究将极大程度上依赖于对模式生物的研究。
这两个系统都是位点特异性重组酶
15、楚塞三湘接，荆门九派通。
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siRNA与RNA诱导沉默复合物（RNA-inducedsilencing
09:43:3409:43:3409:43Thursday,November3,20221、不能将外源基因定向地插入受精卵细胞染色体的特定部位；
2、外源基因随机整合可能引起插入突变，破坏宿主基因组功能；
3、外源基因随机整合在宿主染色体上的拷贝数不同，可能出现不同表现型；
4、整合的外源基因遗传丢失而导致转基因动物症状的不稳定遗传。
二、稳定转染细胞第二节基因敲除技术基因敲除技术的基本过程：③、在目的基因外侧线性化重组载体，并将一个阴性筛选标志基因克隆到此。例如：单纯庖疹病毒（HSV）的胸苷激酶的编码基因为HSV-tk。当它在细胞内合成出胸苷激酶时，可以分解细胞培养液中加入的单核苷酸类似物而产生有毒的分解物使细胞死亡。
这样打靶载体包含了部分待剔除的基因片段、阳性筛选标志基因、阴性筛选标志基因。在特定基因剔除时，利用打靶载体上留下的部分待剔除的基因片段作为基因组上相同基因的同源臂，当打靶载体与细胞基因组的同源基因发生同源重组时，打靶载体上的失活基因替代基因组上的基因，同时利用插入在基因同源臂之间的阳性、阴性标志基因进行鉴定。2、将打靶载体导入小鼠胚胎干细胞中；胚胎干细胞通常取自小鼠胚胎早期的内细胞团，该细胞能在体外培养，并保留发育的全能性。
3、用阳性筛选标志和阴性筛选标志对转染的胚胎干细胞进行筛选。
4、将发生同源重组的胚胎干细胞导入小鼠胚泡中，然后将胚泡植入假孕小鼠子宫中；
5、筛选嵌合体小鼠。通常同源重组一般只发在一条染色体上，可以用Neor基因作探针，通过Southernblot鉴定。
6、杂交育种，获得基因剔除的纯合体小鼠条件性基因敲除、条件性组织特异性基因敲除：
Cre／loxP系统来源于F1噬菌体，可以介导位点特异的DNA重组。
该系统含有两种成分：①一段长34bp的DNA序列，含有两个13bp的反向重复序列和一个8bp的核心序列。这段34bp序列是重组酶识别的位点，被称为loxP位点(10cusofX—overinP1)。
②Cre重组酶(cyclizationrecombination)，它是一种由343个氨基酸组成的单体蛋白，可以引发loxP位点的DNA重组。任何序列的DNA，当其位于两个loxP位点之间的时候，在Cre重组酶的作用下要么被缺失(两个loxP位点的方