蛋白质的共价结构-.ppt

蛋白质的共价结构一、蛋白质通论，。２、蛋白质的含氮量三聚氰胺３、蛋白质的分类（2）、依据蛋白质的组成分类单纯蛋白缀合蛋白（3）蛋白质按生物学功能分类（二）、蛋白质的大小与分子量人为规定Pr分子量上下限
下限一般认为从胰岛素开始，其相对分子量为5700（51个氨基酸残基）
某些Pr由两至多个亚基经非共价结合而成（寡聚蛋白）分子量高达数百/千万。如谷酰胺合成酶（12个亚基组成），如烟草花叶病毒（2130个亚基和一条RNA链构成。蛋白质与多肽无严格的界线
——通常将6000Dr以上的多肽称为蛋白质。
蛋白质分子量变化范围很大（三）、蛋白质构象和结构的组织层次蛋白质的各级结构的基本概念示
例，。肌红蛋白的三级结构和丙酮磷酸异构酶的三级结构血红蛋白四级结构（四）、蛋白质功能的多样性，。生老病死，万物轮回(蛋白质层次)单细胞生物多细胞动物二、肽（peptide），。由两个AA组成的肽称为二肽。
含几个至十几个AA的肽链称为寡肽
由20个AA以上组成的肽则称为多肽。
组成多肽的AA单元称为氨基酸残基。多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序
含游离-氨基的一端：氨基端或N-端
含游离-羧基的一端：羧基端或C-端
AA顺序是从N-端开始以C-端氨基酸残基为终点
如上述五肽：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln
反过来写的是一个不同的肽肽键是aa间的基本连接方式。证据：（一）、肽和肽键的结构①肽键中C-N键有部分
双键性质
——不能自由旋转
②组成肽键原子处于
同一平面（肽平面）
③键长及键角一定
④大多数情况以反式
结构存在共价主链（二）、肽的物理化学性质（三）、天然存在的活性肽+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-
Met-脑啡肽Leu-脑啡肽
L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val

L-OrnL-Orn

L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu

短杆菌肽S(环十肽)
由细菌分泌，含有D-AA和一些不常见AA，如鸟氨酸（Ornithine,Orn）。鹅膏覃碱是一种环状八肽，真核生物RNA聚合酶II的抑制剂（能与RNA聚合酶紧紧结合），。三、蛋白质一级结构的测定1.样品必需纯（>97%以上）
2.知道蛋白质的分子量
3.知道蛋白质由几个亚基组成
4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量
计算每种AA的个数
5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量（一）、蛋白质测序策略（一）、蛋白质测序策略（一）、蛋白质测序策略（一）、蛋白质测序策略，。

（一）、蛋白质测序策略，。（一）、蛋白质测序策略（一）、蛋白质测序策略(9)确定原多肽链中二硫键的位置。
两类多肽链末端氨基酸残基：
N-端氨基酸
C-端氨基酸
在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。

Sanger法
二甲氨基萘磺酰-AA有强荧光，检测灵敏度高
—N=C=S+N—CH—CO—NH—C·······肽链外切酶:从多肽链N-端逐个向里水解
根据不同反应时间测出释放的AA种类和数量，
按反应时间和AA残基释放量作动力学曲线
蛋白质N-末端残基顺序。
最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶
—水解以Leu残基为N-末端的肽键速度最大。氨基酸酰肼可与苯甲醛缩合成不溶于水的物质。
上清中的氨基酸可通过其他方法鉴定（二）、末端氨基酸残基的鉴定肽链外切酶:从多肽链C-端逐个水解
根据不同反应时间释放出的AA种类和数量
蛋白质C-末端残基顺序。
四种羧肽酶：A,B,C和Y；
A和B(胰脏)、C(柑桔叶)、Y(面包酵母)
∽A:除Pro/Arg/Lys/外所有C-末端AA残基
∽B:只水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键
∽Y：可作用于任何一个C-末端残基的肽键（三）、二硫键的断裂1、酸水解2、碱水解1、酶解法:
内切酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、
胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶
外切酶：羧肽酶和氨肽酶R1=Lys（K）或Arg（R）
专一性较强，水解速度快
R2=Pro（抑制）R1=Phe（F）、Trp（W）Tyr（Y）等疏水性AA
Leu、Met和His稍慢
R2=Pro（抑制）
pH8-9R2=Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）、Ile（I）、Met（M）、Val（V）及其它疏水性强的AA水解速度较快
R1和/或R2＝Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）及其它疏水性AA水解速度较快
R1=Pro（抑制）
pH2
肽链2、化学裂解法
①溴化氰水解法(Cyanogenbromide)
——选择性地切割由Met羧基形成的肽键。

②NH2OH断裂：
较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键
Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分断裂
3、肽段的分离纯化：
凝胶过滤、