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显微鉴别法 显微鉴别法系指用显微镜对药材(饮片)切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有代表性的供试品,根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片. 一、药材(饮片)显徽制片 1.横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位,经软化处理后,用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上,根据观察对象不同,滴加甘油醋酸试液(取甘油、50%醋酸与水各1份,混合,即得)、水合氯醛试液(取水合氯醛50g,加水15ml与甘油10ml使溶解,即得)或其他试液1~2滴,盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后,在酒精灯上加热透化,并滴加甘油乙醇(取甘油、稀乙醇各1份,混合)试液或稀甘油,盖上盖玻片。 2.粉末制片供试品粉末过四号(65目)筛,挑取少许置载玻片上,滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液,盖上盖玻片。必要时,按上法加热透化。 3.表面制片将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4mm2,一正一反置载玻片上,或撕取表皮,加适宜的试液或加热透化后,盖上盖玻片。 4.解离组织制片将供试品切成长约5mm,直径约2mm的段或厚约1mm的片,如供试品中薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在,采用氢氧化钾法,若供试品质地坚硬,木化组织较多或集成较大群束,采用硝铬酸法或氯酸钾法。 (1)氢氧化钾法将供试品置试管中,加5%氢氧化钾溶液适量,加热至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去碱液,加水洗涤后,取少量置载玻片上,用解剖针撕开,滴加稀甘油,盖上盖玻片。 (2)硝铬酸法将供试品置试管中,加硝铬酸((1)取硝酸10ml,加入100ml水中,混匀。(2)取三氧化铬10g,加水100ml使溶解。用时将两液等量混合,即得)试液适量,放置至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照上法装片。 (3)氯酸钾法将供试品置试管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸钾少量,缓缓加热,待产生的气泡渐少时,再及时加入氯酸钾少量,以维持气泡稳定地发生,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照上法装片。 5.花粉粒与孢子制片取花粉、花药(或小的花)、孢子或孢子囊群(干燥的供试品浸于冰醋酸中软化),用玻璃棒研碎,经纱布过滤至离心管中,离心,取沉淀加新配制的醋醉与硫酸(9:1)的混合液1~3ml,置水浴上加热2~3分钟,离心,取沉淀,用水洗涤2次,取沉淀少量置载玻片上,滴加水合氯醛试液,盖上盖玻片,或加50%甘油与1%苯酚各1~2滴,用品红甘油胶〔取明胶1g,加水6ml,浸泡至溶化,再加甘油7ml,加热并轻轻搅拌至完全混匀,用纱布过滤至培养皿中,加碱性品红溶液(碱性品红0.1g,加无水乙醇600ml及樟油80ml,溶解)适量,混匀,凝固后即得〕封藏。 6.磨片制片坚硬的动物、矿物类药,可采用磨片法制片。选取厚度约1~2mm的供试材料,置粗磨石(或磨砂玻璃板)上,加适量水,用食指、中指夹住或压住材料,在磨石上往返磨砺,待两面磨平,且厚度约数百微米时,将材料移置细磨石上,加水,用软木塞压在材料上,往返磨砺至透明,用水冲洗,再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。 二、含饮片粉末的制剂显微制片 按供试品不同剂型,散剂、胶囊剂(内容物为颗粒状,应研细),可直接取适量粉末;片剂取2~3片,水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等(包衣者除去包衣),取数丸或1~2锭,分别置乳钵中研成粉末,取适量粉末;蜜丸应将药丸切开,从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后,吸取沉淀物少量。根据观察对象不同,分别按粉末制片法制片(1~5片)。 三、细胞壁性质的鉴别 1.木质化细胞壁加间苯三酚试液1~2滴,稍放置,加盐酸1滴,因木质化程度不同,显红色或紫红色(间苯三酚试液取间苯三酚0.5g,加乙醇使溶解成25ml,即得。本品应置玻璃塞瓶中,在暗处保存;间苯三酚盐酸试液取间苯三酚0.1g,加乙醇1ml,再加盐酸9ml,混匀。本液应临用新制)。 2.木栓化或角质化细胞璧加苏丹Ⅲ试液(取苏丹Ⅲ0.01g,加90%乙醇5ml溶解后,加甘油5ml,摇匀,即得),稍放置或微热,显橘红色至红色。 3.纤维素细胞壁加氯化锌碘试液(取氯化锌20g,加水10ml使溶解,加碘化钾2g溶解后,再加碘使饱和,即得),或先加碘试液湿润后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50),显蓝色或紫色。 4.硅质化细胞壁加硫酸无变化。 四、细胞内含物性质的鉴别 1.淀粉粒 (1)加碘试液(取碘0.5g与碘化钾1.5g,加水25ml使溶解),显蓝色或紫色。 (2)用甘油醋酸试液装片,置偏光显微镶下观察,未糊化的淀粉粒显偏光现象;已糊化的无偏光现象。 2.糊粉粒 (1)加碘试液,显棕色或黄棕色。 (2)加硝酸汞试液,显砖红色。材料中如含有多量脂肪油,