大白菜春化相关基因Bra028171功能鉴定.pptx

大白菜春化相关基因Bra028171功能鉴定春化是大白菜[BrassicacampestrisL.ssp.pekinensis(Lour.)Olsson]开花途径中一个重要的阶段,大白菜需要一定的低温诱导才能从营养生长转变为生殖生长,进而抽薹开花。在春化过程中有一系列基因发挥着作用,共同调节植物的开花进程。
本试验所研究的未知基因Bra028171是本实验室前期的一个研究中,经过春化处理后发生甲基化变化的一个基因,Bra028171位于大白菜第4号染色体上。Bra028171的长度为786bp,是一段保守序列,该基因在拟南芥中有同源基因At5g38320,该基因功能同样未知。
本试验通过克隆该基因,研究其亚细胞定位,探究此基因的表达模式以及构建了超表达和RNAi载体并转化到模式植物拟南芥中来初步分析此基因的功能,进而摸索探究该基因在大白菜春化过程中所发挥的作用。为大白菜抽薹开花的进程提供参考,同时为预防大白菜未熟抽薹的现象提供理论依据。
试验结果归纳如下:(1)通过对Bra028171的序列分析,我们发现该基因在拟南芥中有一个同源基因At5g38320,该基因同样是未知基因。通过对Bra028171的生物信息学分析,我们得到了一些结果:Bra028171全长786bp,形成的蛋白质长度为261,该基因所预测的等电点为5.55,并用在线工具预测了该基因所编码蛋白质的三维结构(2)通过对Bra028171的荧光定量PCR分析,我们知道了该基因在茎部的表达量最高,尤其是在开花期,茎部的表达量明显大于其他的部位,可知该基因主要在茎部表达(3)通过对Bra028171的亚细胞定位分析,发现Bra028171定位于细胞核(4)成功构建了Bra028171的超表达载体和RNAi干扰载体,并用农杆菌介导将重组的质粒导入到了拟南芥中(5)对有抗性的拟南芥进行特异性引物的PCR鉴定,经鉴定,22株超表达载体中有12株是阳性株,16株RNAi载体中,有9株是阳性株,阳性率分别为55%h和56%。
(6)对转基因拟南芥进行了表型调查,发现过表达的植物的开花时间要早于RNAi干扰的植物,植株高度也明显高于RNAi干扰的植株,表明该基因对于成花有促进作用,而缺乏该基因会导致开花延迟的现象。