克伦特罗瘦肉精直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测.docx

克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
摘要：为熟悉盐酸克伦特罗(瘦肉精)的不同检测方法，本实验采用了克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测和盐酸克伦特罗快速检测卡检测两种方法对盐酸克伦特罗阳性样品和阴性样品进行了检测，求出了阳性样品和阴性样品中的盐酸克伦特罗含量。并对两种盐酸克伦特罗的检测方法进行了简单比较。结果表明，ELISA检测法具有具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等优点。而快速检测卡则具有敏感、特异、快速、简便,且无需任何仪器设备等优点。
关键词：盐酸克伦特罗(瘦肉精)、ELISA检测、快速检测卡
1前言：盐酸克伦特罗(瘦肉精)又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，化学名为α-［(叔丁氨基）甲基］4-氨基-3,5二氯苯甲醇盐酸盐。它是一种β肾上腺受体激动剂，是一种白色或类似白色的结晶体粉末，无臭，微苦，化学性质稳定，加热到170℃才能分解。因此，一般的烹调加热方法不能将猪肉和脏器中残留的“瘦肉精”毒性破坏。长期摄入盐酸克伦特罗超标的猪肉，会造成人体胃肠道菌群失衡、发生过敏反应和变态反应并产生“三致”作用ADDINNE.Ref.{3514D58C-CDF7-4B4C-92A5-31128AD3F906}[1]。因此必需建立有效的检测方法，完善对畜牧业的监管，以保障食品的质量，让消费者吃得放心。
2材料与方法
2.1实验材料与试剂
克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测
克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。试剂盒包含如下试剂：
酶标记物（绿盖）1瓶
3,3’5,5’-四甲基联苯胺（TMB）底物液（黑盖）1瓶
底物缓冲液（白盖）1瓶
终止液（黄盖）1瓶
浓缩洗液（透明白盖）1瓶
0μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
0.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
0.3μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
0.9μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
2.7μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
8.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶
包被偶联抗原的96孔酶标板（12条8孔可拆酶标条）1块
塑料封口袋1个内装干燥剂1袋
盐酸克伦特罗阳性样品
盐酸克伦特罗阴性样品
百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
盐酸克伦特罗阳性样品
2.2实验仪器
克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测
微量移液器：100或200μL
水浴锅或烘箱：保温，可选。
酶标仪：MK-13或同类仪器。
洗瓶：500mL，手洗时盛装洗液。
吸水纸：吸干板条残留液体。
样本：尿液或组织样品或饲料样品。
蒸馏水。
洗板机：可选，可用手洗替代。
移液器配套枪头：100或200μL规格。
枪头盒。
2.2.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡
2.3实验方法
克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测
（1）取出96孔酶标板，将需用的条板固定于支架，按顺序编号。1~6号孔为标准品孔，7号孔为阳性样品孔，8为号孔阴性样品孔；
（2）在标准品孔中加入50μL标准品，样品孔加入50μL待测样品。然后每孔加入50μL抗体工作液（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，盖好。37℃条件下温育30min；
（3）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；
（4）每孔加入100μL酶标记物，盖好。37℃条件下温育20min；
（5）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；
（6）每孔加入100μL显色液，轻轻振荡，盖好。37℃条件下温育10min；
（7）每孔加入50μL反应终止液，混匀后在波长450nm（以空气为空白）测定各孔吸光值（必须在加入终止液后60min内读取吸光值。
2.3.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
（1）使用前将待检样本溶液恢复至室温；
（2）从原包装袋中取出检测卡，并于一个小时内使用；
（3）将检测卡平放，用移液枪吸取待检样品溶液100μL垂直加于加样孔，开始计时；
（4）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
结果判定：

阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3ng/mL，或不含有。

阳性（+）：检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3ng/mL。

无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

3实验结果与分析
3.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测

图1克伦特罗标准曲线图
根据上图计得出盐酸克伦特罗阳性样品与盐酸克伦特罗阴性样品中的克伦特罗含量如下图：
表1样品中克伦特罗的含量