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单环刺螠纤溶酶ufeII基因的原核表达及活性研究
单环刺螠（Scolopendrasubspinipesmutilans）是一种常见的多足类动物，具有很强的捕猎和防御能力。其中，其体内的纤溶酶（Fibrinolyticenzyme）具有很高的活性，因此在医学和生物技术领域具有广泛的应用前景。本文针对单环刺螠纤溶酶ufeII基因的原核表达及活性进行了研究。
1.实验方法
1.1ufeII基因的克隆
本实验采用PCR技术，使用单环刺螠的基因组DNA作为模板，以ufeII基因序列特异性引物进行扩增，获得大小为1.2kb的DNA片段。
1.2原核表达载体的构建
本实验选择pET28a作为原核表达载体，使用T4DNA连接酶将ufeII基因与载体进行连接，构建出含ufeII基因的pET28a-ufeII原核表达载体。
1.3原核表达与纤溶酶活性分析
使用大肠杆菌BL21进行ufeII基因的原核表达，收获含有纤溶酶ufeII的细胞，进行离心、超声破碎等步骤，获得所需纤溶酶分泌物。接下来进行SDS-PAGE鉴定和酶活性分析。
2.结果分析
2.1ufeII基因的克隆
PCR扩增结果显示，ufeII基因在单环刺螠基因组DNA中存在，并且其大小符合理论大小。
2.2原核表达载体的构建
经过酶切分析和DNA测序，确认构建出含ufeII基因的pET28a-ufeII原核表达载体。
2.3原核表达与纤溶酶活性分析
经过大肠杆菌BL21的原核表达，收获的目标蛋白分泌物在SDS-PAGE中呈现相应的蛋白带，符合预期。在酶活性分析中，发现纤溶酶ufeII具有很高的释放纤维蛋白溶解酶（Plasmin）和血管内皮生长因子（VEGF）的能力，具有较强的生物活性。
3.结论
通过克隆ufeII基因，构建出含ufeII基因的pET28a-ufeII原核表达载体，并成功对其进行原核表达和提取。纤溶酶ufeII具有很高的酶活性，具有潜在的应用价值。本研究为下一步研究单环刺螠纤溶酶的酶学特性和其在医学领域的应用奠定了基础。