影响脱分化和再分化的因子.ppt

第四章影响植物细胞脱分化和再分化的因子植物离体培养中，影响植物细胞脱分化和再分化的因子有外因和内因两个方面。4.1培养基的影响无机盐混合物类：提供植物细胞的无机营养，维持培养基的酸碱度和渗透压。
（1）大量元素
植物脱分化、再分化形态建成，需要量较大的的一类元素。包括N、P、K、S、Ca、Mg等。
硝态氮和铵态氮的应用比例，可根据植物的类别灵活调用。
（2）微量元素
与植物代谢有密切关系。常用：Fe、Mn、Zn等。用量虽少，但是作用不小。有机物类：
（1）碳水化合物：细胞碳源和能源，也调节培养基的渗透压。
（2）维生素类
（3）有机氮源：氨基酸和酰胺类，对细胞的脱分化、再分化器官建成都起重要作用。植物激素类
1.常用激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素
（1）生长素类
在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感。
活性：2，4－D>NAA>IAA
浓度范围：0.1－15mg/L（2）赤霉素
主要用于刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗茎的伸长生长。此外，赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。此外，赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。
常用GA3（3）细胞分裂素类
培养基中添加细胞分裂素有三个作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长，细胞分裂素与生长素相互作用，当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，而避免在生根培养时使用。
活性：ZT>BA>KT
浓度范围：0.1－10mg/L
2.激素的应用规律：
离体培养时，在生长素存在的条件下，细胞分裂素的作用有加强的趋势，不过两者在使用上有一定的顺序关系，由于处理的顺序不同，会影响培养物器官发生的方向。
先生长素，后分裂素处理有利于细胞的分裂，但细胞不分化。
先分裂素再生长素处理，细胞也分化。
两者同时处理时，分化频率提高。但是两者同时处理时用量比值会改变形态建成的方向。总之
自然界植物的种类、品种繁多；离体培养时取材也是形形色色；培养目的也不尽相同，要想使植物激素的应用技巧“得心应手”使不容易的，唯一的办法就是多实践
离体培养时，在使用外源激素时，还受到内源激素的干扰。目前对内源激素的测定尚无准确、简便的方法，故对能源激素难以做到定量、定性分析。因此在外源激素的应用上，还处于比较盲目的阶段。天然复合物
成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用，特别是新的生长调节物质不断产生，更缩小了它的使用范围。可是由于其对一些难以生长培养材料的特殊作用，所以在一些试验中还常常应用它。4.1.2培养基的渗透压4.1.2.2渗透压调节物质
糖对培养基渗透压起决定性作用。
4.1.2.3糖的种类与糖浓度
种类：蔗糖、葡萄糖、果糖等
浓度控制：
植物材料不同
不同培养目的
培养方式不同4.1.3培养基的酸碱度4.1.3.2培养基pH调节的依据
1）按照植物长期生活所处环境的酸碱度进行调节
2）依据培养基硬度来决定
一般来说当pH高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固
3）依据培养基中某些物质的稳定性（Fe、赤霉素等）不同植物的最适pＨ值
4.2环境条件主要是培养瓶以外环境的相对湿度存在的间接影响。当外界相对湿度低于60％时，培养基容易干涸，会改变培养基的渗透压。相反，当外界湿度过高时，培养室潮湿，具备了细菌和霉菌的滋长条件，会造成培养基和培养材料的污染。一般要求70～80％的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。4.2.2温度条件
离体培养下，培养温度与植物细胞脱分化、细胞分裂和再分化有着密切的关系。大多数植物都是在23～27℃之间进行，一般采用25±2℃。低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。
但是，不同的植物材料对不同的温度反应是不一样的。不同培养目标采用的培养温度也不同。4.2.2.1离体培养条件下温度控制的原则
主要依据：植物的起源和生态类型
喜温性植物：26－28℃
冷凉性植物：18－22℃或<25℃
再细胞进行脱分化阶段（诱导期）和愈伤组织增殖期（分裂期），对温度的要求较高；而在器官发阶段（分化期）要求低些。4.2.2.2培养周期中的昼夜温差
恒温培养还是变温培养？
4.2.2.3低温处理
在花药离体培养前后，实施低温预处理，可以促进细胞的脱分化和再分化。现已成为一种有