RNAi和siRNA转染.ppt

RNAi和siRNA转染内容第一部分RNAi实验基本概念主要内容1.RNAi的概念2006年度诺贝尔生理学或医学奖共同授予安德鲁·菲尔和克雷格·梅洛，他们发现了“RNA干扰机制—双链RNA沉默基因”。2.RNAi的启动途径(1)dsRNA途径(2)siRNA途径(3)shRNA表达载体途径3.非哺乳动物系统的RNAi实验4.哺乳动物系统的RNAi实验5.RNAi效应表现第二部分哺乳动物系统的RNAi实验设计主要内容1.需要短期抑制还是长效抑制?2.采用siRNA进行实验的途径3.构建shRNA表达载体进行实验4.siRNA设计需要注意的问题(1)siRNA的设计(2)阴性对照siRNA的作用(3)阳性对照siRNA的重要性(4)siRNA荧光标记的问题5.RNAiOff-target(脱靶效应)(1)RNAiOff-target(脱靶效应)是什么？(2)脱靶效应如何检测？(3)siRNA浓度是否和脱靶效应相关？(4)转染试剂是否也会造成脱靶效应？(5)如何避免脱靶效应？6.转染是RNAi实验的瓶颈(1)选择转染方法的原则(2)siRNA转染的方法(3)siRNA转染试剂的主要种类(4)脂质体(5)非脂质体聚合物类第三部分siRNA转染过程相关问题及解答1.siRNA转染过程相关问题(1)转染细胞数量的问题(2)转染时siRNA工作浓度(3)转染时血清的问题(4)转染时抗生素的问题(5)转染过程(6)转染后换液的问题(7)转染条件优化的问题(8)RNAi效应检测方法2.siRNA转染疑问解答