三聚氰胺检测方法.docx

MARS-HPLC测定不同基质中的三聚氰胺
摘要：MARS(Multi-adsorptionReverseSPE)样品前处理方法是一种快速、简便、安全、成本低廉的样品前处理分析方法，将该方法用于奶制品、鸡蛋和鱼肉等不同样本中的三聚氰胺的提取，主要步骤是使用0.1M的盐酸、6%的磺基水杨酸和混合型阴离子交换树脂（CleanertPAX）在离心管中同时进行蛋白沉淀和基质分散固相萃取，取离心上清液过滤后用于HPLC测定。本文对MARS方法用于不同样品前处理的稳定性和可靠性进行了分析和评价，结果表明MARS-HPLC方法用于不同样品中三聚氰胺的检测具有简便、快捷、准确的优点，适合大批量样品的测定。关键词：三聚氰胺；MARS；混合型阴离子交换树脂；强阳离子交换色谱柱1实验部分1.1仪器与试剂仪器：L6-1系列高效液相色谱仪（北京普析通用公司），三聚氰胺检测样品前处理方法包：（包括盐酸0.1mol/L，6%磺基水杨酸，混合型阴离子交换填料CleanertPAX，（北京艾杰尔科技有限公司）；VenusilSCX-M，5μm,4.6×250mm强阳离子交换色谱柱（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）及保护柱；针式过滤器（AgelaClarify，0.22/0.45µm，尼龙）；三聚氰胺标准品（>99%），均质器（T25Basic，IKA）。试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。1.2色谱条件色谱柱：VenusilSCX-M色谱柱，4.6×250mm,5μm,300Å；（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5mL/min；柱温：室温；波长：240nm；实验中若非特别注明，进样量均为20μL。1.3三聚氰胺标准曲线工作液的配制1.3.1三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×103mg/L。称取100mg三聚氰胺标准物质（准确至0.1mg），用水完全溶解后，用水定容至100mL，混匀。1.3.2标准工作溶液1.3.2.1标准溶液A：2.00×102mg/L。准确移取20.0mL三聚氰胺标准贮备溶液（1.3.1），置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.2标准溶液B：0.50mg/L。准确移取0.25mL标准溶液A（1.3.2.1），置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.3标准工作液的配制按表1分别移取不同体积的标准溶液A（1.3.2.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。按表2分别移取不同体积的标准溶液B（1.3.2.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。
表1标准工作液配制（高浓度）
标准溶液A体积(mL)0.10.251.001.255.0012.5定容体积(mL)100100100505050标准工作液浓度(mg/L)0.200.502.005.0020.050.0表2标准工作液配制（低浓度）
标准溶液B体积(mL)1.002.004.0020.040.0定容体积(mL)100100100100100标准工作液浓度(mg/L)0.0050.010.020.100.201.4试样的制备1.4.1牛奶样品取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L盐酸10mL，加入6%磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（CleanertPAX），用0.1mol/L盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。1.4.3鸡蛋样品取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6%磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（CleanertPAX），用0.1mol/L盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。1.4.4鱼肉样品取5.0g剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/L盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6%磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（CleanertPAX），用0.1mol/L盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。2、结果与讨论2.1线性范围低浓度曲线取0.005mg/L,0.01mg/L,0.02mg/L,0.1mg/L,0.2mg/L5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：
图1低浓度标样线性高浓度曲线取0.2mg/L,0.5mg/L,2mg/L,5mg/L,20mg/L,50