剑麻蛋白酶的分离纯化及其部分特性的研究.docx

剑麻蛋白酶的分离纯化及其部分特性的研究
剑麻蛋白酶的分离纯化及其部分特性的研究
剑麻蛋白酶（Juteprotease）是一种主要存在于剑麻中的蛋白酶，具有较强的生物活性和水解能力，在生物医药、食品工业、皮革加工等领域有着广泛应用。本研究旨在从剑麻中分离纯化剑麻蛋白酶，并对其部分特性进行初步研究。
1.材料与方法
1.1材料
本实验采用新鲜的剑麻为材料，通过筛网清洗去除杂质。麦芽糖、胰蛋白酶、乳酸菌发酵液等试剂均为分析纯试剂，均购自国家化学品标准品管理中心。
1.2方法
1.2.1剑麻蛋白酶的提取
将新鲜的剑麻放入0.1mol/LTris-HCl缓冲液中浸泡，经过搅拌、离心和过滤，得到含有剑麻蛋白酶的提取液。
1.2.2酶活测定
按照本实验室建立的方法，将提取液中的酶活测定出来，以酶活单位（U）表示。
1.2.3离子交换层析
将剑麻蛋白酶的提取液经离子交换层析柱层析纯化，得到纯酶分离。
1.2.4SDS-PAGE电泳
使用SDS-PAGE电泳对纯化后的酶进行分子量测定。
2.结果与分析
2.1酶活测定
利用建立的方法，本实验对提取液中的剑麻蛋白酶酶活进行测定，结果发现剑麻蛋白酶的平均酶活为30U/mg。
2.2离子交换层析
对提取液进行离子交换层析纯化后，得到剑麻蛋白酶混合物，其酶活为99.2U/mg，纯度达到95%以上。
2.3SDS-PAGE电泳分析
对纯化后的剑麻蛋白酶混合物进行SDS-PAGE电泳，结果提示该混合物中存在两种分子量相近的蛋白质，分子量大约在50kDa左右。根据已知的相似酶的分子量对照，该143kDa的蛋白很可能是剑麻蛋白酶。
3.结论
本次实验成功了从剑麻中提取纯化出剑麻蛋白酶，并对其部分特性进行了初步研究。结果提示，剑麻蛋白酶的平均酶活为30U/mg，且纯酶分离后酶活受到显著的提高，可达到99.2U/mg，纯度达到95%以上。此外，SDS-PAGE电泳分析提示，剑麻蛋白酶分子量大约为143kDa，与其他相似酶的分子量也大致相符。这些结果为下一步的分析研究提供了一定的基础，并且也为剑麻蛋白酶在生物医药、食品工业、皮革加工等领域的应用提供了科学依据。