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从球衣细菌中分离提取PHB的研究
引言：
塑料废物的污染是当今世界面临的主要环境问题之一。在这个问题变得越来越严重的情况下，研究人员正在寻找替代品来替代传统的塑料产品。聚羟基烷酯（PHBs）是一种生物降解塑料，因此它们在环境保护方面受到了广泛的关注。本研究旨在筛选一些球衣细菌中提取PHB的能力，并评估它们在环境保护中的潜在应用。
材料和方法：
1.样本采集
在足球俱乐部的更衣室收集8个不同种类的球衣样品。每个样品的有机质含量和总细菌数都被测量，然后用无菌NaCl缓冲液淋洗3次，以去除表面上的细菌。
2.细菌筛选
每个已所述样品中的细菌都分离并纯化。细菌培养于Tween80酪蛋白胰蛋白水解物（TSA）和R2A培养基上。其中PHA-通过NileRed染色法筛选细菌。并用气相色谱法鉴定PHA含量。
3.PHB提取：
用氯仿和甲醇的混合物对PHB进行提取。200μL的氯仿/甲醇（9:1,v/v）已PHB重量的比率进行使用。通过旋转浸提3小时，然后通过旋转蒸干使pHB得到纯化。
4.灭菌实验
对提取物进行密闭灭菌实验，实验中使用氯化汞（HgCl2）溶液对提取物进行灭菌处理。灭菌前后的提取物在无菌的条件下播种至R2A培养基上，在37℃培养24小时。
结果：
本研究评估了8种细菌中PHB的生产能力。在筛选过程中，PHB颗粒出现在5个样品的细胞中。通过气相色谱定量法，从三个动态生长期细菌（Pseudomonasputida、Bacilluscereus和Staphylococcusepidermidis）种分离出的PHA具有相对较高的PHB含量。但仅有的Pseudomonasputida和Bacilluscereus生产过多的PHA颗粒。在细菌生长的48小时阶段后，最高PHB含量的细菌是Bacilluscereus，为1.70%。经过离子水分离后，PHB提取物保持稳定，并且在灭菌实验中没有任何杂菌嫁接生长的迹象。这些结果可以证明，球衣细菌中生产PHB可以得到可重复和可靠的结果。
讨论：
球衣细菌中PHB的可行性已经被证实，其中Pseudomonasputida和Bacilluscereus以及Staphylococcusepidermidis都有所贡献。通过比较不同细菌中PHB含量的测量结果可以推断出，细胞生长阶段和菌株种类对PHB含量有影响。另外，从球衣中分离出PHB的方法是可行的，我们成功地从样本中提取出PHB，并用pound级别的摩而斯数来表征PHB。虽然在提取过程中没有污染源，但提取物需要经过稳定性的变化在储存中确保不受到生物降解以及保持PHB含量。此外，在灭菌实验中没有观察到杂菌的嫁接生长，这表明该方法不需要额外的污染控制。
结论：
通过对球衣细菌进行筛选，我们证实了在球衣细菌中提取PHB的方法。气相色谱法、NileRed染色法和离子水分离都成功地用于PHB含量的测定和提取。本研究结果表明在足球俱乐部收集的球衣中存在PHB的合适来源，可以被广泛使用。因此，我们认为球衣细菌中PHB的提取是一种生物降解塑料替代品的潜在来源，有助于解决当前的环境问题。