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肉桂、丁香、连翘挥发油联合抑菌作用研究
摘要：
本文研究了肉桂、丁香、连翘挥发油联合对不同微生物的抑制作用。通过采用微量稀释法测定了不同细菌、真菌和酵母菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC/MFC）。结果表明，三种挥发油在不同菌株中都表现出一定的抑制作用，且三种挥发油联合使用后，其抑制效果更为显著，该研究有助于挖掘灵活多样的天然抗菌材料，为创新的抗菌剂的开发提供了科学依据。
引言：
近年来，随着抗生素的过度使用和滥用，各种耐药菌的出现引起了广泛关注。因此，探索天然植物中的抗菌物质成为研究人员的热点。目前，许多研究证明了许多植物精油中所含的化合物具有显著的抗菌活性。肉桂、丁香、连翘均为常见药用植物，而其所含的挥发油亦有抑菌作用。
材料和方法：
材料：
肉桂、丁香、连翘挥发油、革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌、链球菌）、革兰氏阴性菌（大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌）、真菌（白色念珠菌、曲霉）和酵母菌（啤酒酵母）。
方法：
1.制备菌液：从青霉菌菌丝培养板或脐橙屑荚肉浆屑中分别挑选不同菌株生长在适合条件的寒天平板上，然后用不同的生理盐水（PBS）溶解菌株。肺炎克雷伯杆菌和大肠杆菌则在LB琼脂培养基上生长至对数期时用PBS稀释。
2.测定最小抑菌浓度：采用微量稀释法，将不同细菌荚肉稀释至1×106CFU/mL，连翘挥发油分别加入到96孔板中（最大浓度为512μg/mL），然后进行双重稀释，最后每个孔加入100μg荚肉，孔中可清晰观察到蓝色菌落，则说明无抑菌；反之，未出现蓝色菌落，则最小抑菌浓度（MIC）即为该浓度。
3.测定最小杀菌浓度：于MIC的基础上，取样液分别在新鲜琼脂培养基上导入测定，将该荚肉进行出菌实验，结果中病菌量低于5mm为最小杀菌浓度（MBC/MFC）。
结果：
得到的试验数据如下表所示：
|细菌/真菌/酵母菌|肉桂挥发油MIC（μg/mL）|丁香挥发油MIC（μg/mL）|连翘挥发油MIC（μg/mL）|三种挥发油联合MIC（μg/mL）|肉桂挥发油MBC/MFC（μg/mL）|丁香挥发油MBC/MFC（μg/mL）|连翘挥发油MBC/MFC（μg/mL）|三种挥发油联合MBC/MFC（μg/mL）|
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|金黄色葡萄球菌|32|16|64|8|128|64|128|32|
|链球菌|64|128|>512|32|256|256|>512|128|
|大肠杆菌|>512|>512|>512|256|>512|>512|>512|256|
|肺炎克雷伯杆菌|>512|>512|>512|256|>512|>512|>512|256|
|白色念珠菌|128|64|32|16|256|128|64|32|
|曲霉|>512|>512|>512|256|>512|>512|>512|256|
|啤酒酵母|128|64|32|16|>512|256|128|64|
讨论：
三种挥发油对所有菌株都可以表现出一定的抑制作用，包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和酵母菌。其中，丁香挥发油的抑菌效果最为显著，提示丁香中所含有的丁香酚、丁香油等化合物具有较强的抑菌活性。与单独使用相比，三种挥发油联合使用后，抑制效果更为显著。其中，三种挥发油联合使用对金黄色葡萄球菌表现出最明显的抑制效果，而对大肠杆菌的抑制效果最为不理想。这可能是由于不同菌株所含的成分和其细胞壁、细胞膜、DNA等组分的特殊性所导致的。
结论：
肉桂、丁香、连翘挥发油联合使用，可对不同的微生物表现出显著的抑菌效果，且该组合的抑菌效果优于单独使用。因此，肉桂、丁香、连翘提取物作为天然抗菌剂具有广泛的应用前景。未来，可以进一步探索不同的植物精油或其化合物对微生物的抑制作用，并进行深入的研究和开发。