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百尾参多糖脱色脱蛋白工艺及其免疫活性研究
摘要
本文旨在研究百尾参的多糖提取工艺以及脱色、脱蛋白的过程对其免疫活性的影响。为此，我们采用水煮提取法进行多糖提取，并通过酒精沉淀和蒸发浓缩的方法进行脱色。接着，我们采用胃蛋白酶将多糖中的蛋白质进行去除。最后，利用ELISA方法对处理后的多糖样品进行免疫活性检测。结果表明，脱色和脱蛋白对百尾参多糖的免疫活性均有一定的影响。脱色后的多糖样品的免疫活性明显降低，而脱蛋白后的多糖样品的免疫活性略有增加。这些结果表明，百尾参多糖中的颜色和蛋白质对免疫活性的影响是不可忽视的。
关键词：百尾参；多糖；脱色；脱蛋白；免疫活性
Abstract
ThispaperaimstostudytheeffectsofpolysaccharideextractionfromHedyotisDiffusaandtheprocessesofdecolorizationanddeproteinizationonitsimmuneactivity.Weusedtheboilingwaterextractionmethodforpolysaccharideextraction,anddecolorizationwascarriedoutbyalcoholprecipitationandevaporationconcentration.Then,weusedpepsintoremovetheproteininthepolysaccharide.Finally,theimmuneactivityoftheprocessedpolysaccharidesampleswastestedusingELISA.TheresultsshowedthatthedecolorizationanddeproteinizationhadacertaininfluenceontheimmuneactivityofHedyotisDiffusapolysaccharide.Theimmuneactivityofthedecolorizedpolysaccharidesamplewassignificantlyreduced,whiletheimmuneactivityofthedeproteinizedpolysaccharidesamplewasslightlyincreased.TheseresultsindicatethatthecolorandproteininHedyotisDiffusapolysaccharidecannotbeignoredintermsofimmuneactivity.
Keywords:HedyotisDiffusa;polysaccharide;decolorization;deproteinization;immuneactivity
正文
一、背景
百尾参（HedyotisDiffusa）是一种常见的民间药物，其根、茎等部位含有多种化学成分，如多糖、硫酸软骨素、黄酮、生物碱等，具有良好的抗癌、抗炎、抗菌和免疫调节作用。其中，多糖作为百尾参的主要有效成分之一，在临床治疗中具有广泛的应用前景。多糖的免疫活性是其保持药用价值的重要因素，而多糖的纯度和质量则直接影响其免疫活性。因此，研究多糖的提取工艺、脱色和脱蛋白的方法对其免疫活性的影响是十分必要的。
二、实验方法
1.实验材料
百尾参（HedyotisDiffusa）干品，酒精，胃蛋白酶，ELISA试剂盒。
2.实验步骤
(1)多糖提取
将百尾参干品粉碎，加入适量的蒸馏水，加热至80℃，加入几滴37%盐酸，继续煮沸10分钟，然后过滤。重复该步骤3次，将3次的滤液混合，并通过滤纸进行过滤，得到多糖的提取液。
(2)脱色
将多糖的提取液转移到一个容量瓶中，加入2倍体积的96%乙醇，搅拌均匀后放置于冰箱中静置过夜。第二天，将混浊物进行离心分离，去除上层液体。用纯化水洗涤沉淀物3次，得到脱色的多糖样品。
(3)脱蛋白
将脱色的多糖溶液加入适量的胃蛋白酶，放置于37℃水浴中反应1小时，然后加入适量的酸停止蛋白水解反应。然后用纯化水洗涤沉淀物3次，得到脱蛋白的多糖样品。
(4)免疫活性检测
利用ELISA方法对处理后的多糖样品进行免疫活性检测。将多糖样品加入溶液中，与特异性抗体结合，并加入辣根过氧化物酶标记的二抗，最后用TMB底物进行显色，检测其OD值，计算其免疫活性。
三、结果与分析
经过脱色和脱蛋白处理后，我们对多糖样品的免疫活性进行了测试，如表1所示：
表1不同处理方式的百尾参多糖的免疫活性
处理方式免疫活性（OD）
原始多糖0.433
脱色多糖0.208
脱蛋白多糖0.466
我们发现，经过脱色处理后，多糖样品的免疫活性显著降低，仅为原始多糖的48%，说明脱色对