生物样品的扫描电镜制样干燥方法.docx

生物样品的扫描电镜制样干燥方法
随着生物学实验的不断开展和技术的不断进步，对于生物样品的研究也越来越重要，其中电子显微镜技术的应用越来越广泛。而对于扫描电镜技术来说，样品的制备是十分重要的一个环节，影响着后续研究结果的准确性和可靠性。因此，在这篇论文中，将介绍生物样品扫描电镜制样干燥方法及其原理，以期为相关研究者提供一些参考和帮助。
一、扫描电镜制样的基本原理
扫描电镜（SEM）是一种强大的显微镜，可以对样品表面的形态和组成进行非常细致的观察，并拍摄高分辨率的图像进行分析。因此，样品的制备和处理对于SEM的成像效果至关重要。
SEM的成像原理是利用聚焦的电子束扫描在样品表面，收集反射、散射和次级电子等不同类型的信号，形成图像。因此，样品的制备需要尽可能地使表面平整光滑，同时去除表面细小颗粒和水分等杂质，以为电子束顺利地扫过表面，获得清晰的图像。以下将详细介绍制样干燥的方法和注意事项。
二、生物样品扫描电镜制样干燥方法
1、制样前准备
首先需要准备好SEM使用的制样器、SEM制样夹、粘胶带、甲醛、丙酮、枯燥剂、离心机等设备。
生物样品制备前需进行PCR扩增、构建载体以及高通量测序等步骤，例如，PCR扩增后的产品应经过聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖电泳纯化，构建成功的载体应经过限制性内切酶鉴定。
2、固定和处理生物样品
生物样品的制备需要进行细胞或组织的固定和处理，常用的方法包括甲醛固定、丙酮处理或酒精梯度固定等。
（1）甲醛固定法：
将生物样品置于甲醛溶液中静置3-4小时，然后换甲醛溶液置放过夜。将样品转移到1×PBS中冲洗数次，最后加入约为0.05M的丙酮中固定30min。再用去离子水冲洗，并加入去离子水中置放几小时进行漂白。置入枯燥器中干燥数小时，后续可使用SEM的标准制样法制样。
（2）丙酮处理法：
将生物样品置于去离子水中预冷处理数小时，然后使用甲醛和0.05M的丙酮混合液进行固定。置入0.03M丙酮中降温5°C，并于-80℃冷冻30min，反复3次。冷冻后置入-20℃下化解1小时，并进行愈伤组织的处理方法。置入枯燥器中干燥，再后续实验即可使用。
（3）酒精梯度固定法：
将生物样品放入10%酒精中固定1小时，再放入95%酒精中固定约5小时，再次放入100%酒精中固定数小时，取出后直接置于枯燥器中进行干燥。使用SEM中标准制样法进行制样。
3、样品壁卡法
在制作有机物样品的SEM样品时，通常使用粘胶带将样品黏附并固定在制样针上。由于若去除固着的粘合剂，样品表面会留有一层薄膜，使SEM的观察变得不清晰，所以这种方法常被用于制作大量的样品。
4、样品的热压和离心
有些生物样品因为结构特殊等原因不能直接气干，可以通过样品热压或离心方法来制样。
样品热压法是通过将样品放置于金属夹中，然后置入真空封闭的固定样品室中，红外加热恒温器将载物夹加热至压力和温度均符合指定条件后，通过样品的去污剂挥发，样品表面形成干燥的有机膜。
离心法可将生物样品放入离心机中进行，去除表面的过量水分和悬浮颗粒等杂质，然后在清洁无尘的实验台上自然气干。
5、电子束辐照法
将样品置于真空室中进行强度和时间不一的电子束辐照，以“闪”干样品表面，并消除表面水分。
以上就是扫描电镜制样干燥方法的几种常见方式。在制备样品的过程中，也需要注意一些细节问题。
三、生物样品扫描电镜制样的注意事项
1、注意样品表面是否平整光滑，需去除表面细小颗粒和水分等杂质。
2、使用制样夹时应调整合适的夹力，使样品夹紧且不会损伤。
3、在制作过程中，需重复处理、干燥和视觉检测样品表面质量，以防止在制作过程中产生不合格制样物。
4、在使用SEM仪器前，需先对SEM进行调整和校准工作。
5、可在SEM观察游离的有机体等细胞谷物时，用丙酮溶剂固定样品，以防止其松散。
四、总结
通过本文的介绍，我们对生物样品扫描电镜制样干燥方法有了更加详细的了解。在制作样品时，不同的方法都有其各自的适应的场合。最后，希望这篇论文对为扫描电镜样品制备的相关研究者提供一定的帮助和指导。