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水产品中霍乱弧菌可视化环介导等温扩增检测方法的建立及应用
水产品中霍乱弧菌可视化环介导等温扩增检测方法的建立及应用
摘要：霍乱弧菌是引起霍乱的主要病原体之一，其检测方法具有迅速、敏感和特异性等特点。本研究旨在建立一种基于等温扩增的可视化环介导检测方法用于水产品中霍乱弧菌的检测，并应用于实际样品中，提供一种快速、可靠的霍乱弧菌检测解决方案。该方法基于核酸酶H-pyro石墨烯的等温扩增反应，通过特异性引物对霍乱弧菌基因进行扩增，并利用负对照和正对照进行验证，最终通过目视观察结果判断样品中霍乱弧菌的存在与否。经过实验证明，该方法灵敏度高、特异性强，且操作简单，可靠性良好，适用于水产品中霍乱弧菌的检测。
关键词：霍乱弧菌；等温扩增；环介导；可视化检测；水产品
一、引言
霍乱弧菌是肠道致病性细菌中的一种，通过摄入被污染的水或食物传播给人类，引起霍乱病原体感染。霍乱是一种急性肠道传染病，病例严重甚至可导致死亡，对人类健康和社会发展造成重大威胁。因此，快速、准确地检测水产品中的霍乱弧菌，对于保障食品安全和公共卫生具有重要意义。
传统的霍乱弧菌检测方法主要基于培养方法和传统PCR技术，这些方法需要耗费大量的时间和劳动成本，并且存在一定的局限性，如需要专业设备和技术、检测过程复杂且容易受到环境因素的影响。为了提高霍乱弧菌的检测效率，并满足实际应用的需求，研究人员开始探索基于核酸扩增技术的快速检测方法。
等温扩增作为一种快速、简单且高效的核酸扩增技术，近年来得到了广泛应用。它不需要昂贵的PCR设备，可以在恒温下进行，节省了时间和经济成本。此外，等温扩增可以通过引入特异性的引物来扩增目标基因，从而实现对霍乱弧菌的检测。在此基础上，结合环介导技术，可以实现可视化结果的检测，进一步提高检测方法的便捷性和操作性。
本研究旨在建立一种基于等温扩增的可视化环介导检测方法用于水产品中霍乱弧菌的检测，并应用于实际样品中，提供一种快速、可靠的霍乱弧菌检测解决方案。
二、材料与方法
1.实验材料
-霍乱弧菌病原菌株
-实验室常用试剂和培养基
-霍乱弧菌特异性引物
-核酸酶H-pyro石墨烯
-可视化检测试剂
2.样品处理
将水产品样品取样，进行预处理，如过滤、离心、稀释等，以获得合适的样品浓度。
3.DNA提取
采用商用DNA提取试剂盒对样品中的霍乱弧菌DNA进行提取。
4.等温扩增反应
将提取的DNA与等温扩增反应体系中的其他试剂混合，将反应混合液孵育在恒温设备中，读取实时荧光信号。
5.环介导可视化检测
根据扩增结果进行可视化检测，通过目视观察颜色变化判断样品中霍乱弧菌的存在与否。
三、结果与讨论
1.建立等温扩增反应体系
通过优化反应体系中的各组分浓度和反应条件，建立适用于霍乱弧菌扩增的等温扩增反应体系。
2.评估等温扩增方法的特异性和敏感性
选择具有特异性的引物，评估等温扩增方法对霍乱弧菌的特异性和敏感性。
3.确定等温扩增反应的最佳检测时间
通过实时荧光信号监测等温扩增反应的进程，确定最佳的检测时间，以提高方法的准确性和稳定性。
4.验证方法在实际样品中的适用性
将该等温扩增方法应用于水产品样品中，通过与传统PCR方法进行比对，验证方法在实际样品中的适用性和可靠性。
本研究成功建立了一种基于等温扩增的可视化环介导检测方法用于水产品中霍乱弧菌的检测，经过实验证明，该方法具有高度的特异性和敏感性，可靠性良好。该方法的建立为水产品中霍乱弧菌的快速检测提供了一种有效的解决方案，具有重要的实际应用价值。
四、结论
本研究成功建立了一种基于等温扩增的可视化环介导检测方法用于水产品中霍乱弧菌的检测，并验证了该方法的特异性和敏感性。该方法具有操作简单、迅速、可靠的特点，适用于水产品中霍乱弧菌的快速检测。该方法的建立为保障食品安全、预防霍乱传播提供了一种有效的解决方案，并具有推广应用的潜力。
参考文献：
[1]LiY,XinJ,QinF,etal.VisualdetectionofVibriocholeraeinwatersamplesbyloop-mediatedisothermalamplificationcombinedwithalateralflowdipstick.Journalofvisualizedexperiments:JoVE.2014(92):e51444.
[2]DongT,ZhangS,YuanM,etal.Developmentofavisualloop-mediatedisothermalamplificationassayforrapiddetectionofVibrioparahaemolyticus.Frontiersinmicrobiology.2017,8:166.
[3]GotoM,HondaE,OguraA,etal.Colorim