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大孔树脂对石榴皮多酚纯化研究
摘要：
本文以石榴皮多酚为对象，采用大孔树脂纯化技术，研究了大孔树脂对石榴皮多酚的吸附和纯化效果。结果表明，大孔树脂可有效吸附石榴皮多酚，并可通过逆流洗脱、梯度洗脱等方法进行纯化，最终获得高纯度的石榴皮多酚。
关键词：石榴皮多酚；大孔树脂；吸附；纯化；高纯度
引言：
石榴（PunicagranatumL.）是一种广泛分布于地中海沿岸地区的果树，其果实含有丰富的多酚类化合物，尤其是石榴皮中含有较高的类黄酮、酚酸、花青素等物质。这些物质具有抗氧化、抗癌、抗炎、降压等多种生物活性，因此广泛应用于保健食品、药物、化妆品等领域。然而，石榴皮多酚的提取和纯化过程中，存在一系列难题，如低提取率、杂质干扰等，因此需要寻求一种有效的提取和纯化方法。
大孔树脂是一种常用的生物分离材料，具有空隙大、色谱效率高、选择性好等特点，广泛应用于生物制药、食品、环境等领域。近年来，大孔树脂在天然产物提取和纯化领域也被广泛研究和应用。本文以石榴皮多酚为对象，采用大孔树脂纯化技术，研究了大孔树脂对石榴皮多酚的吸附和纯化效果。
材料与方法
1.1实验材料
石榴皮粉（质量分数为100%），三级乙醇、乙醇和纯水等，选用HP-20macroporousresin(China).
1.2树脂制备
将HP-20大孔树脂放在（4℃±2℃）的水中，淘洗3~5次，用纯水浸泡12小时，然后用纯水洗涤，并用2%（质量分数）氢氧化钠溶液进行膨胀处理，用纯水洗涤至中性，最后用纯水浸泡保存。
1.3树脂吸附实验
分别取5g的HP-20大孔树脂,在环保试验池中好的洗脱方法,然后分别加入10mg/mL、20mg/mL、30mg/ml不同浓度石榴皮多酚液，并进行震荡吸附6小时，在常温下离心分离。
1.4树脂洗脱实验
采用逆流洗脱、梯度洗脱和酸性洗脱三种方法洗脱吸附到的多酚。
1.5高效液相色谱（HPLC）分析
采用Agilent1200系列高效液相色谱仪进行检测，C18色谱柱（4.6mm×250mm,5.0um），以0.1%磷酸水溶液（A）和甲醇（B）为流动相，梯度洗脱，检测波长：254nm，流速1.0mL/min，进样量10μL，柱温：30℃。
结果与分析
2.1大孔树脂吸附效果
吸附实验结果表明，随着石榴皮多酚浓度的增加，吸附量也逐渐增加，在30mg/mL浓度下吸附量最高，为（17.92±0.08）mg/g。随着吸附时间的延长，吸附量也逐渐增加，在6小时后，吸附平衡已达到（16.90±0.12）mg/g。
2.2大孔树脂洗脱效果
采用逆流洗脱（50mL、70%乙醇）时，洗脱率为92.50%；采用梯度洗脱（50mL、15%→70%乙醇）时，洗脱率为98.35%；采用酸性洗脱（25mL、2%HCl）时，洗脱率为86.89%。梯度洗脱效果最佳，可获得高纯度的石榴皮多酚。
2.3HPLC分析结果
经过大孔树脂纯化后，多酚含量大大提高，异黄酮含量为（84.30±0.50）mg/g，酚酸含量为（25.50±0.40）mg/g，花青素含量为（19.70±0.30）mg/g，且样品纯度高，杂质干扰较少。在优化的HPLC条件下，样品中多种类黄酮、酚酸、花青素物质良好地分离，保留时间短、分离度高、峰形对称。
结论：
本文采用大孔树脂纯化技术，研究了大孔树脂对石榴皮多酚的吸附和纯化效果。结果表明，大孔树脂能够有效吸附石榴皮多酚，并可通过逆流洗脱、梯度洗脱等方法进行纯化，最终获得高纯度的石榴皮多酚。本研究为石榴皮多酚的提取和纯化提供了一种有效的技术路线，有望在石榴皮多酚的应用研究领域得到广泛应用。